マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）文化

サマリー

ここでは、マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）を分離する手法を示す。テクニックは、膨らみを分離し、組織培養にそれをplaceing、ミクロ解剖ウィスカの卵胞を伴います。 4日間 - EPI - NCSCは、3つの内の基層の上に膨らみの外植片からの移住を開始します。

要約

EPI - NCSCは大人の場所、毛包のバルジの胚神経堤の名残です。彼らは神経細胞、神経支持細胞、平滑筋細胞、骨/軟骨細胞とメラノサイトを含む分化した細胞型の広い配列を生成するために生理学的性質を持つ多能性幹細胞である。 EPI - NCSCは、有毛皮膚に容易にアクセス可能であり、幹細胞の純度の高い人口として単離することができる。このビデオでは、ウィスカの卵胞からマウスEPI - NCSC培養を調製するための詳細なプロトコルを提供します。成体マウスのウィスカーパッドが削除され、ウィスカの卵胞は、解剖される。卵胞は、バルジ領域の上下に縦方向にし、続いて横方向にカットされています。膨らみは、コラーゲンのカプセルから削除され、培養プレートに配置されます。 EPI - NCSCは3〜4日後にバルジの外植片からの移住を開始します。

プロトコル

成体マウスのウィスカの卵胞からバルジの解剖

1. 我々は、10週間〜6ヵ月齢のマウスを使用してください。若いマウスでは、しばしば複数のセルをもたらす。 betadine（ヨウ素溶液）と約3分間過酸化水素（薬局から入手可能）の1:1混合物中にマウスと水没全体の動物を安楽死させる。
   
2. 潮吹き全体、特にマウス、顔領域、75％エタノールで、そして層流フードで解剖顕微鏡にマウスを運ぶ。
3. 慎重に毛の球根にカットし、HBSSでプールを避け、ウィスカーパッドを解剖。
4. 室温でのHBSSでウィスカの卵胞とプールを細かく分析。ピンセットで毛包に次のスキンを保持し、ストレートはさみで卵胞の周りにカットすることでこれを行います。毛の球根を負傷を避けるために深くカット。
5. ウィスカーパッドのウィスカの卵胞を持ち上げて、新鮮なHBSSで新しい皿に入れ。
6. ウィスカの卵胞がきれいになるまで、バッファのホヤとゆるいadipousと皮膚組織をフラッシュします。必要に応じて、ウィスカの卵胞に神経を切断し、こするとHBSSを繰り返しフラッシュすることによって付着組織を除去する。
7. 卵胞の隣にある皮膚の部分に保持するためのmicroforcepsを使用して、シャープにタングステン針を使用してSylgardコーティングされたガラスペトリ皿にきれいな毛のfollilceを固定。
8. マイクロブレードでlongitudicallyウィスカの卵....

ディスカッション

それらの回遊能力のおかげで、EPI - NCSCは、in vitroで拡張できる幹細胞の高度に純粋な人口として単離することができる。大人の場所にある胚の残党として、EPI - NCSCは、将来の細胞置換療法、生物医学工学および/または再生医療のための潜在的に魅力的な候補です。我々は、彼らが望ましい形質を示す脊髄損傷のマウスモデルでEPI - NCSCをテストしている。我々が期待どおりに、ことを示したLongSAGE（www.ncbi.nlm.nih.gov /ジオ、シリーズ番号GSE4680）、胚の神経堤細胞とEPI - NCSCの共有による遺伝子発現プロファイリング近隣のものとは異なる類似の遺伝子発現パターンを介して表皮幹細胞と他の皮膚の常駐幹細胞/前駆細胞。

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