マウス卵黄嚢とAGMから早期の造血幹細胞の分離

サマリー

このビデオでは、胚から卵黄嚢と大動脈 - 生殖腺 - 中腎領域をマイクロ細かく分析し、造血幹細胞をソートするには、フローサイトメトリーを使用する方法を示します。

要約

マウス胚では、初期の造血は卵黄嚢と大動脈性腺中腎領域を含む複数の臓器に同時に発生します。これらの領域は、胚の血液系の確立に極めて重要であり、胎児の肝臓及びその後bonemarrowにおける成体幹細胞の開発に幹細胞の最終的な動きにつながる。初期の造血幹細胞はこれらの器官から、より純粋な集団を得るために、フローサイトメトリー選別が続く胚の顕微解剖によって単離することができる。これらの幹細胞集団は、胎児および成体幹細胞のプールに貢献する方法、それは不明なままである。また、私たちの研究室では、初期の幹細胞が機能的に胎児と成人の造血幹細胞からどのように異なるか調査する。さらに、私たちの研究室をソート造血幹細胞の異なる集団と遺伝的モデルのさまざまな文脈でそれらの機能的役割をテストします。コロニーアッセイと骨髄移植：このビデオでは、我々は我々が一般的に使用し、また、これらの貴重な個体群を隔離typical FACSのplotfterの結果を示す顕微解剖の手順を紹介する、それが含む機能的アッセイのさまざまな実行することが可能です。

プロトコル

マウス卵黄嚢と大動脈 - 生殖腺 - 中腎領域からの初期の造血幹細胞の解離と分離

1. 開始する前に、手続に必要なすべての試薬とツールを持つことが重要です。
   
   • はさみ
   • 鉗子、サイズ4、および外科グレードの曲がった先端鉗子、サイズ5 / 45（オプション）
   • シリンジと30ゲージの針
   • 35mmと100ミリメートルペトリ皿
   • 10％、20％ウシ胎児血清を含むPBS
   • そして最後に、コラゲナーゼ
2. 解剖を開始するには、我々は、10.5日後に懐妊​​した時に妊娠中の女性から子宮角を収穫する必要があります。
3. 動物は、承認された手順に従って安楽死させる。我々は、頸椎脱臼に続く二酸化炭素の窒息を、使用してください。
4. 女性の腹部にはエタノールを用いてウェットであり、皮膚をはさみで開かれます。
5. ピンセットで皮膚を押し、追加のカットは、腹膜を開くように作られています。
6. 腹部が開かれ、子宮角を可視化することができる。子宮角を保持するための鉗子を用いて、それぞれの遠位端と消費税の両方の角をに中心をカット。
7. 子宮角をして子宮組織を削除するには、10％FBSを冷PBSを含むペトリ皿に配置されます。
8. サイズ4鉗子を使用して、顕微鏡の下で働いて、静かに胎盤ではない穿刺に注意して、各胚の受胎前後から子宮内膜....