養殖および土壌試料からの細菌を列挙します。

1. 土壌の希釈液の調製

1. 手順を開始するには、土壌サンプルの 10 g を量り、95 mL の脱イオン水を加えます。よく、懸濁液を振るし、"A"としてラベルを付けます。
2. 土が落ち着く前に滅菌ピペットで懸濁液の 1 mL を削除し、容量 9 mL の脱イオン水空白にそれを転送します。渦徹底的と"B"とラベル。
3. この希釈手順 3 回、毎回前懸濁液 1 mL、9 mL の脱イオン水空。C、D、および E をチューブ、順番にこれらをラベルします。これは、結果 10^-1 10^-5グラムの 1 mL あたり土 ~ のシリアル希薄、

2 細菌培養用、拡散板

1. 細菌のコロニーを成長し、C、D、および e. 渦のサンプル C として、D と E、および各プレート上に 0.1 mL のピペットなど 3 つの事前に用意されたペプトン酵母寒天とラベルを取る。これは 10 の要因によってさらに、希釈価値を高める (C 10^-3D = 10^-4E を = = 10^-5)。
2. 次に、ガラス スプレッダーをエタノールに浸し。数秒を発火させ、エタノールを燃焼火炎の拡散機を配置します。これは、スプレッダーを滅菌します。
3. 炎が消滅するまでは、最初のプレートの上散布を保持します。蓋を閉じるを保持しているプレートを簡単に開けます。接種から寒天にスプレッダーをタッチ (接種文化を開始するために使用するセルの =) クール、そして自由液体の痕跡が消えるまで寒天の表面を菌のドロップを普及します。プレート蓋を取り付けます。
4. 再炎の拡散機と次のプレートは、迅速に作業を繰り返して浮遊生物、寒天培地を汚染しないように
5. 1 週間室温で細菌の版を孵化させなさい。寒天培地の表面に落下からの凝縮から水分の低下を防ぐために潜伏中にプレートが反転されていることを確認します。

放線菌のため 3. 拡散板

1. 放線菌の成長、3 つの事前に用意されたグリセロール-カゼイン プレートを取ると前述のテクニックとして B、C、および D. を使用してそれらのラベル、拡散板 B、C、および D. 懸濁液から 0.1 mL放線菌は、通常細菌の人口の 1/10^thとしているため、低い希釈 (B = 10^-2C = 10^-3D = 10^-4)。
2. 2 週間室温 (反転) 放線菌プレートを孵化させなさい。

4. 細菌や放線菌数

1. インキュベーション後、慎重に、すべての細菌の版を調べるし、コロニーのサイズと形状の違いに注意してください。寒天上に成長した、細菌は無色透明からピンクや黄色、明るいオレンジ色に至るまでぬるぬるしたコロニーを生成します。対照的に、放線菌のコロニーは、しっかりした、革のようなされて、他の細菌のコロニーが中傷する圧力の下で入ります。これにより滅菌ループとの接触によって区別される植民地です。
2. カウントし、放線菌を含む細菌のコロニーの数を記録します。プレート プレートごと 30 200 コロニーとカウントされます。

5. 純粋培養の分離

1. 個々 の細菌のコロニーをプレートのいずれかから選択します。土に特に興味がある場合より多くの植民地を選択できます。それは、よく分離されている純粋な植民地を持っている傾向がある高希釈プレートを使用します。近隣植民地から十分に分離、互いから明瞭な形態学的に見えるコロニーだけを選択します。
2. ループをアルコールに浸漬し、それを炎で滅菌します。すぐに、関心のペトリ皿を開き、それを冷却する寒天培地の裸地にループをタッチします。少量のループに関心の植民地を削除します。
3. 連勝数センチを作る新鮮なペプトン酵母プレートを取って 1 つの側面に長い。消毒し、再度、クールな最初のパスでのみ初期の連勝を越える連勝をします。同様にさらに 2 回繰り返します。この光線「希釈」は、互いから分離されているループのセルに結果します。2 週間室温でインキュベートする暗い部分にプレートを配置します。