検量線

1、基準を作る: シリアル希薄

1. 標準の濃縮原液を作る。通常、化合物は、正確に計り、定量的、メスフラスコに転送されます。いくつかの溶剤を追加、サンプルが溶解するのでミックスを適切な溶媒との行に入力されます。
2. シリアルの希薄を実行します。別のメスフラスコを取ると、希釈に必要な標準量をピペット、溶媒との行に記入し、混ぜます。だから 10 mL メスフラスコ、10 倍希釈が行われた通常、前希釈の 1 mL を追加します。
3. 次のサンプルを作ることを希釈する前のソリューションのピペッティングより多くの希薄のため必要に応じて継続します。良い校正曲線の少なくとも 5 の濃度が必要です。

2. 校正曲線と未知のサンプルを実行します。

1. 検量線に必要な楽器の応答を判断する紫外可視分光光度計のサンプルを実行します。
2. 最初のサンプルに読書を取る。体系的なエラーがある場合、ランダムな順序 (すなわちない最低または最高に最低に最高) でサンプルを実行することをお勧めします。騒音の推定値を得るためにどのようなサンプルを読み 3-5 x を繰り返します。
3. ノイズの見積もりを取得する各サンプルの測定を繰り返し、その他の標準サンプルを実行します。後でプロットするデータを記録します。
4. 未知試料を実行します。できるだけ基準を実行するいると同様の条件として使用します。したがって、サンプル マトリックスまたはバッファーは同じにする必要があります、pH が同じである必要があります、濃度、基準の範囲で実行してください。

3. 検量線を作る

1. スプレッドシートにデータを記録、データ対の濃度をプロットするコンピューター プログラムを使用します。少なくとも帳票の測定は、各ポイントの撮影された、誤差範囲が各ポイントの誤差を推定するこれらの測定値の標準偏差のプロットできます。いくつかの曲線のデータ行を取得するログとして軸にプロットする必要があります。方程式を検量線を支配する一般に知られている前もってログ プロットがある、ので式のログ。
2. 較正曲線を確認します。それは線形に見えますか。それが非線型に見える部分を持っている (すなわち応答関数の制限に達しました) ですか?調べるには、ソフトウェアを使用して線形回帰するすべてのデータに適合します。(²R) の係数が高くない場合は、直線の調整を再び線形回帰を実行する表示されない先頭または曲線の終了点のいくつかを削除します。それは大きな誤差があるからといって、途中でポイントを削除する受け入れられないです。この解析から線形曲線のどの部分を決定します。
3. 線形出力形式 y の関係式をする必要があります = mx+b と、m は傾き、b は y 切片です。勾配の単位は、この例 (図 1) 吸光度/μ M で y 軸ユニット ・濃度、です。Y 切片の単位は、y 軸の単位です。(²R) の係数が得られます。高い R²より良いフィット。完璧なフィット感を与える 1 の R² 。プログラムはまた、傾きと切片の誤差の推定値を与えることができるかもしれません。

4. 結果: 検量線 #1 青色色素の吸光度を

1. #1 青色色素の吸光度の較正曲線 (631 で nm) (図 1) 以下の通りです。応答が線形 0 から 10 μ M. の上にその濃度信号を開始レベル オフ応答紫外可視分光光度計の線形の範囲外であります。
2. LOD を計算します。検量線の傾きから LOD です 3*S.D (ノイズ)/m。この検量線のノイズは繰り返し測定の標準偏差を求めたし、0.021 をだった。LOD は、3*0.021/.109=0.58 μ M になります。
3. LOQ. を計算します。LOQ です 10*S.D (ノイズ)/m。この検量線 LOQ は 10*0.021/.109 = 1.93 μ M。
4. 未知の濃度を計算します。線路方程式を使用して、未知試料の濃度を計算します。検量線のみ未知の世界標準試料の線形の範囲に該当する場合に有効です。測定値が高すぎる、希釈が必要かもしれません。この例では、不明なスポーツド リンク希釈 1:1 であった。吸光度は 0.243、これは 2.02 μ M の濃度に対応しました。青い染料 #1 での最終的な集中したがって、スポーツの飲み物だった 4.04 μ M。

図 1。青色色素の紫外可視吸光度の較正曲線。左: #1 青色色素の濃度の吸光度を測定しました。吸光度が 1 以上の場合、10 μ M 後の応答が頭打ち。誤差範囲は同一試料の繰り返し測定からは、標準偏差です。右:ライン、較正曲線の直線部分を合わせて y = 0.109 * x + 0.0286。未知のデータが黒で表示されます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。