5.6: 化合物の管理私

1。 皮下注射

1. 手動で抑制する片手の拘束を介してマウスを保持します。つかめば、テーブルまたはその他のセキュリティで保護された表面に残りの部分にマウスを許可します。マウスの体に圧力を置くことを避けるようにしてください
。
2. は、呼吸を妥協することができますマウスに過度な重量を避けるためにテーブルの上の手のかかとを置きます。マウスは、商業デバイスでも拘束することができます。、ラットの商業拘束デバイスを使用するをお勧めします。
3. 皮膚をつかんで引き上げて皮膚のテントを作成します。拘束デバイスを使用して、鉗子が一番上のスロットを通して肌を把握する必要があります
。
4. は、背骨には、テントの皮の折目の基部に頭から離れる方向に平行の針を挿入します。頭蓋骨とパンクの可能性を避けるために頭から針を直接マウスの頭蓋の骨は非常に薄い。ラットには首の筋肉注射を引き起こす可能性のある自分の頭をリアに傾向がある
。
5. は、肌に優しい滑空できるようにを針ベベルを挿入します。針が皮膚をつかむ指の下に挿入されている注意してください。鉗子、針棒の傷害の可能性を排除でバイオハザードの記事を注入するときは、安全性を向上させるため、皮膚を握った
。
6. は、適切な配置を確認するプランジャーを引き戻します。注射器に空気を描画すると、それは針の先端が皮膚の下の位置にないと取り下げし、再配置する必要がありますを示します。プランジャーは後ろで束ねて、針の適切な配置を示します、注射が進むことができるときに背圧がある場合
。
7. は、安定した動きでゆっくりと物質を注入します。注入資料の損失を防ぐためには、注入後に一時停止、少し皮膚の下の針を回転させるし、針を撤回しながら注射部位の皮膚をつまむ
。

図 1。マウス皮下注射

2。 腹腔内投与

1. マニュアル片手の束縛メソッドを使用します。それはマウスの回転を防ぐために首に十分に高く配置されるように手を調整します
。
2. 親指と人差し指の間に首のうなじにたるんだ皮膚を把握します
。
3. いずれかの 2 番目、3 番目、および 4 番目の背面に沿ってたるんだ皮膚を固定することによって後部四分の一を安定させるための指と親指の 3 番目と 4 番目の指の間尾を配置することによってベース
。 ラットの
4. IP インジェクション 2 人、ラットおよび他の注入を実行を抑制する 1 つが必要です。
   1. 肩首と背中に手のひらのそれぞれの側に人差し指と中指を使用してラットの把握。親指と薬指と前方または後方の動きを防ぐために胸を囲む必要があります。首の両側に指の位置はその頭を回すからネズミを防ぐことができます
   。
   2. ラットを持ち上げて腹側腹部を公開するを有効にします
   。
   3. 足と尾をしっかりと把握し、体から離れてそれらを拡張する後部四分の一を安定させる
   。
5. マウスまたはラット腹部、それが上向きに確保を公開するを配置します
。
6. 約 30 ° の角度で、前方に落ちる腸を許可する下向きの頭の動物を傾ける
。
7. 注入ランドマークは、次のとおり:
   1. 注入するエリアは頭側 (側腹部の側面に) から体の腰の上部に水平方向に横切って架空の線によって接される
   。
   2. 正中線は内側の縁は、反対方向に生えた毛が満たしていると認識です。毛のない動物の正中線は肛門に直線で、剣から拡張します
   。
   3. 外側縁は男性の包皮にヒップの上から、ヒップと次の女性の乳首の上からライン
   。
   4. これは安全に注射の三角形の領域を提供します
   。
8. ランドマーク内資料の注入
   1. 前述三角形で、正中線から背骨に垂直の針を挿入します。腹部の両側を活用した安全に注射体の平面に 90 ° の角度で針を配置することができます。注射部位の交替により組織の外傷を最小限に抑えるよう、これは複数の注射では特に重要です
   。
   2. 針は 90 ° の角度で置かれたとき、それは " ポップ " 深さの容易に定量を可能にする、腹部に。また、これは針が正しく配置されている視覚と触覚キュー
   。
   3. 腹腔内、膀胱や腸、血管構造ではなく配置を確保するため注射器を吸い出しなさい
   。
   4. 避けるため注入陰嚢の嚢に記事を管理するを防ぐために雄のマウスに尾の方。外傷を防ぐために女性の乳首には関わらないようにします
   。

図 2。マウスの腹腔内注射用ランドマーク

3. 筋肉内注射

1. 拘束この技はマウスおよびラットの 2 人または拘束チューブの使用が必要です。拘束デバイスを利用した単身メソッドではここで説明します。
   1. 拘束装置で動物を配置します
   。
   2. 動物は、チューブ、チューブから後ろ足で動物の位置に尻尾を把握します
   。
   3. 脚を拡張し、膝関節の曲げを防ぐ大腿骨の頭蓋の部分で側面の皮膚を把握します
   。
   4. 拘束デバイスを移動する動物とテーブル上に立っている ' s 頭が下向きまたはテーブルに横になっている注射を実行している間、デバイスの安定化を許可するように技術者の体に向かって指摘した
   。
   5. 注入のランドマークは以下のとおりです: マウスとラットの両方の脚が、後肢で最大の筋肉で構成される臀部の筋肉 (尾側の太ももの筋肉) と小さい; 後肢の二番目に大きい筋肉は腓腹筋 (ふくらはぎの筋肉)。注射は、脚の尾の側面から作られます。
      1. 検索、殿筋質量、大腿骨の後方。骨を触診することができ、大きな筋肉が簡単に感じられます
      。
      2. 後面から脚の正中線が尾に飛節のポイントから実行されることに注意してください。髪があります、それは外側と内側のサーフェスから反対方向に大きくなっても一緒に、来るリッジ
      。
      3. 注射は、正中線を太ももの外側面に向けて作られています。これは神経や脚の内側の表面にある血管の損傷の可能性を低減
      4. 外側伏在静脈の位置の注意深い考察と後部側面から腓腹筋に作られた注射が行われています
      。
   6. ランドマーク内資料の注入
      1. 臀筋の 5 mm の最大深さと腓腹筋の 3 mm の最大値を上記のように正中線を大腿骨に垂直に針を挿入します
      。 筋肉組織内の針の余分な動きへの外傷を避けるため
      2. を防止する必要があります。注射器は注射を実行するための手の位置の変更を必要としない方法で開催する必要があります
      。
      3. 筋肉内のそしてない血管の配置を確保するため注射器吸引します
      。
      4. は、安定した、流体の動きで材料を挿入します。ない筋肉の遅い展開を許可するよう急速に注入を行います。急速静注は、組織の外傷を原因となります
      。

図 3。ラットの臀筋に筋肉内注射します

4。 尾静脈を用いた静脈注射

1. 動物の拘束は動物の麻酔かどうかに依存しているまたは目がさめています。
   1. 用円筒鋼管意識下マウスやラット、毛や裸を除いて動物。毛のない動物の油性の性質のため、硬質プラスチックに付着する傾向がある彼らの皮膚再配置およびアクリルの restrainers からそれらを削除することは困難です。したがって、柔軟なプラスチック製のコーンを使用します
   。
   2. 照明プラットフォーム、温水のプラットフォーム、およびマウスが尾の張力を厳密に円錐形で保存されている硬質のプラスチック コーン他の噴射装置が含まれます
   。
   3. 麻酔下マウスには拘束が必要があります
   。
   4. 暖かい体全体や尻尾の血管の血管拡張を確保するためテールだけ。
      1. 媒体や循環水毛布 on 電気暖房パッドで体全体を暖かきます
      。
      2. 熱源に包まれた拘束装置で動物を配置します
      。
      3. は、動物を密接に観察、血管を拡張させるとすぐに熱源から取り外します。体全体が地球温暖化は、ケージに指示熱ランプを使って実現できます。熱ランプを使用する場合、動物観察されなければならない密接にそれらを過熱しがちだと
      。 タオル、湯瓶から温湿布を使用してまたは暖かい水に尾を水没、体全体が温暖化ができないとき、一人で尻尾を加熱するときの
      4. を実現できます。注意は、湯たんぽ、温めたタオルと暖かい水の温度コントロールを持っていないので尾の書き込みを避けるために採用する必要があります。最初過熱する熱源が一般的です。これらの熱源もすばやく冷却します
      。
   5. ・ ティシュー ・ オイルの使用は血管の可視化を強化する別の方法。
      1. 組織オイルに綿の先端アプリケータを浸しし、安定化のためスイングアー尾の部分からもオイルを適用します。ティッシュ オイル原因血管をより明確に定義された表示します
      。
      2. が、市販皮膚と蒸発を伴う血管拡張の温暖化を作成する定式化に化学物質が含まれている無害のオイルです。これらのオイルを適用し、血管が表示されてとき、いくつかの瞬間後余分な油はコットン ボールを持つ拭い
      。
      3. すべてのオイル尾を保持するためにより困難にすることができます
      。
      4. オイルを使用する場合、注入しなければならないすぐに血管の可視化します
      。
   6. 注入ランドマークは、次のとおり:
      1. 外側尾静脈、尾の両側に位置します。また、背側と腹側中線尾の注入の目的のために適しているないに沿って走る血管があります
      。 外側の血管注入の容易さのために直面しているので、
      2. 、落で動物を回転できます。注射用より受諾可能な位置に船をもたらすに尾をオンことができますまたは、します
      。
      3. 血管が非常に表面的です。表面的、尾の根元に届くようになる
      。
   7. 記事の尾静脈注入スキルが必要です。血管の外傷を避けるためには、針の余分な動きを防がれなければなりません。注射器は注射を実行するための手の位置の変更を必要としない方法で開催されます。
      1. が尾を配置、容器が表示され、張力の下で握られました。尾に過度の緊張は適用されませんまたは血管を伸ばすことができるし、血流が減少した
      。
      2. できるだけ限り遠位血管に直接針を配置します
      。
      3. はわずかな圧力を適用し、針を脊椎に尾平行にスライドさせます。釣り針を避けるため下方、針が血管を縦断面。内腔に進出は、少なくとも 2 ミリメートル針が容器に表示する必要があります
      。
      4. 容器の破裂を避けるためにゆっくりと、流体の動きで材料を挿入します
      。
      5. 注入中に尻尾に特別な注意を払う。容器に正しく挿入されて、容器に流れる注入材料が抵抗なく感じています。注入材料に血液が押し出されると血管を湯通しする必要があります
      。
      6. 針が、容器内でない場合があります強い抵抗を注入します。力で注入材料が皮下の領域がいっぱいし、尾がバルーンします。静脈内に注入するのに設計されている材料が周囲の組織に苛性ソーダありますを直ちに停止します。針を撤回し、尻尾に頭側より別の注射を試みる
      。
      7. 成功注入後、針を撤回し、ケージに動物を返す前に良い止血を保証するために、注射部位に圧力を適用します
      。

図 4。マウスに静脈注射を尾します

化合物の投与は、多くの場合、動物実験の不可欠な要素であり、化合物が正しく人道的な方法で送達されることを保証するために、多くの要素を評価する必要があります。2つの主要な投与経路は、消化管を介した経腸投与と消化管外の非経口投与です。主な違いは、化合物が経腸経路を介して投与される場合、血流に入る前に肝臓代謝を受けることです。一方、静脈内や筋肉内などの非経口経路では、この最初の通過が肝臓を通過するため、通常はバイオアベイラビリティが高くなります。

化合物投与に関するシリーズのこの最初のビデオでは、まず、一般的な投与経路の選択に影響を与える要因について説明します。次に、皮下注射(SCまたはSubQ)、腹腔内注射またはIP、筋肉内注射またはIM、静脈内注射(別名IV)など、最も一般的な非経口注射方法を確認します。

まず、あらゆる種類の化合物投与手順を実行する前に留意すべきいくつかの点を確認しましょう。最初のステップは、注入する溶液または懸濁液を調製することであり、物質調製の最初の基本的な考慮事項は無菌性です。動物への病原体の導入を防ぐためには、注射材料、および使用する針と注射器が無菌であることが重要です。

2 つ目の考慮事項は、生理学的な適合性です。投与溶液は、経腸投与か非経口投与かにかかわらず、化合物が適切に吸収され、組織の損傷を防ぐために、適切なpHに生理学的に緩衝する必要があります。3つ目の要因は、注射剤の粘度で、針の選択に重要な役割を果たします。通常、マウスやラットの非経口投与手順では、20〜30ゲージの針が使用されます。これらの針のハブは通常、識別を容易にするために色分けされています。

溶液は、これらの針の少なくとも1つを通過するのに十分な流動性を持っている必要があります。ソリューションが複数のものを通過できる場合、一般に、選択可能な最小ゲージです。次の要因は、シリンジの選択に影響を与える投与量です。針と同様に、正しい目盛りで正確な投与に必要な可能な限り小さなシリンジを選択する必要があります。針ゲージと投与量は、ルート、および投与される動物の種類、サイズ、および年齢にも依存します。このビデオで説明したルートに関連する値を確認するには、以下の表 1 を参照してください。最後に重要な考慮事項は吸収率であり、これは各投与経路によって大きく異なり、最適な方法を選択する上で役割を果たす可能性があります。

それでは、日常的に採用されている注射方法の特異な特徴についてお話ししましょう。

SCまたはSubQインジェクションは、皮膚を持ち上げることによって作成される仮想空間に、皮膚層と筋肉の間に材料を配置します。これにより、大量の安全な注入が可能になりますが、吸収速度は他のルートよりも遅く、より持続的な効果が得られます。IP投与中、化合物は腹腔内に直接注入されます。これも、大量の溶液を送達するために使用される一般的な方法です。IP注射は非経口投与と見なされますが、吸収メカニズムは実際には経口投与に似ています。

IM注射は、化合物を臀筋または腓腹筋に直接送達します。IMを注入した物質は、筋肉組織内の血管の数が多いため、急速に吸収されるため、場合によっては好ましい経路になる可能性があります。筋肉への不適切な注射や繰り返しの注射は、神経損傷を引き起こし、麻痺や筋肉の壊死を引き起こす可能性があります。最後に、動物の尾静脈へのIV注射は、物質が循環器系に直接導入されるため、最も効果的な投与経路です。化合物は、尾の側面にある外側尾尾静脈の1つに注入する必要があることに注意してください。尾の腹側正中線に沿って走る血管がありますが、これは注射目的には適していません。

さて、背景を説明してきたところで、SC注射から手順を学んでいきましょう。マウスの場合は、動物の尻尾をつまんで、ワイヤーバーの蓋などの別の安全な面で休ませます。次に、首の周りの皮膚を持ち上げて動物を手動で拘束し、テントを形成します。次に、後ろ足を表面につけて動物をテーブルに置き、手のかかとをテーブルに載せて、動物に過度の体重がかかって呼吸を損なわないようにします。

注射するには、注射する溶液の入った注射器を手に取り、針を脊椎と平行にして頭から離して、頭蓋骨に穿刺する可能性を避けます。次に、斜角を上に向けて針を挿入し、肌に優しく滑り込ませます。プランジャーを引き戻して、適切な針の配置を確認します。プランジャーを後ろに引いたときに背圧がある場合、針は正しい位置にあります。プランジャーに空気が引き込まれると、針を再配置する必要があります。

針がきちんと配置されていることを確認したら、安定した動きでゆっくりと注入します。注射後は一時停止し、注射物の損失を防ぐために、針を皮膚の下でわずかに回転させます。.次に、注射部位の皮膚をつまんで針を引き抜きます。これと同じ方法は、離乳ラットにも使用できます。

成体のラットの場合、まず動物を装置を使用して拘束する必要がありますが、その手順については、このコレクションの「取り扱いと拘束の基本」ビデオで説明しています。その後、マウスで行うのと同じ方法でSC注射を行うことができます。

次に、IPインジェクションの実行方法を学びます。マウスでは、両手拘束技術を使用して動物を手動で拘束します(これも「取り扱いと拘束の基本」ビデオで説明しています)。利き手でない手が首の十分な高さに配置され、動物が向きを変えるのを防ぐことを確認してください。尻尾を3本目と4本目の指の間に挟むか、残りの指と親指の付け根の間に皮膚をしっかりと固定して、後肢を安定させます。

次に、動物を腹部を露出させるように配置します。頭を下に向けて動物を傾けますか 30?腸が前方に落ちるように角度をつけます。注射のランドマークは、次のように概説できます:脇腹から脇腹まで、体を横切って水平に伸びる架空の線を引きます。次に、反対方向に成長する髪が交わる線に沿って、内側の境界線または正中線を描きます。最後に、男性では腰の上部から包皮まで、女性の乳頭に続く線である横方向の境界線を想像してください。これにより、安全なIP注入のための三角形の領域が得られます。

次に説明する方法は、IMインジェクションです。この手法をマウスとラットの両方で拘束するには、2人または拘束チューブを使用する必要があります。ここでは、拘束装置を利用した一人用メソッドについて解説します。

まず、動物をチューブに入れ、後ろ足を出して尻尾を引っ張って動物を配置します。次に、大腿骨の頭蓋部分で脇腹の皮膚をつかんで脚を伸ばし、窒息が曲がるのを防ぎます。次に、注射部位が見えるように拘束装置を配置します。

臀筋のランドマークを特定するには、大臀筋の後方にある臀筋量を特定します。骨を触診でき、大きな筋肉が感じられやすいです。ホックのポイントからテールまで伸びる正中線に注意してください。側面と内面の毛が合わさった畝が逆方向に伸びているのをよく見かけます。通常、注入は正中線から外側の側面に向かって行われます。腓腹筋はふくらはぎの筋肉であり、この筋肉への注射も後面から行うのが最適です。

臀筋の場合、位置するランドマークで、針を最大約5mmの深さまで挿入します。筋肉の損傷を防ぐために、注射中にシリンジの位置を変えることは避けてください。次に、吸引して、配置が血管ではなく筋肉内にあることを確認します。そして最後に、急速な注入は組織の外傷を引き起こすため、ゆっくりと着実に材料を注入します。挿入と同じルートに従って、針を垂直に取り外します。腓腹筋の場合は、針を最大3mmの深さまではめ込み、臀筋と同じように注射を行います。

最後に、げっ歯類の尾静脈にIV注射を行う方法を学びましょう。同じ方法がマウスとラットの両方に適用できます。

動物を円筒形の拘束チューブに入れ、MEDIUMに設定された電気加熱パッドを使用して動物の全身を約2〜5分間温めます。血管が拡張し、それが著しく大きくなるまで、動物を温め続けます。尾側尾静脈は尾の側面にあることを忘れないでください。腹側正中線にある動脈は、注射目的には適していません。拘束装置を回転させ、側尾静脈が上を向き、張力がかかった状態で保持されるように尾を配置します。過度の張力をかけないと、血管が伸びて血流が減少する可能性があります。

針をできるだけ遠位の血管の真上に斜めに置き、わずかな圧力を加えて針を脊椎と平行に尾に滑り込ませます。ゆっくりと流れるような動きで材料を注入し、注入材料によって血液が押し出されると血管が白くなることに注意してください。針が血管内にきちんと位置付けられていないと、注入時に強い抵抗が生じ、力を入れて注入すると材料が皮下空間に埋まり、尻尾が膨らんでしまいます。静脈内注射されるように設計された材料は、周囲の組織に腐食性である可能性があるため、すぐに停止してください。針を引っ込めて、尾にもっと頭蓋をくるように別の注射を試みます。注射が成功したら、針を引き抜き、注射部位に圧力をかけて、動物をケージに戻す前に良好な止血を確保します。

一般的な注射方法に慣れてきたところで、薬物送達以外のこれらの投与経路のいくつかの応用例を見てみましょう。

いくつかの実験では、マウスに特定の病原体を注射して感染を研究しています。ここでは、研究者たちは皮下経路を使用して、病変を引き起こす抗生物質耐性菌を導入し、これらの病変のサイズが病原体の病原性を読み取るのに役立ちました。さまざまな科学者が、全身送達後の幹細胞の分布と生存の研究に関心を持っています。この研究では、研究者は多発性硬化症動物モデルで遺伝的にタグ付けされた神経幹細胞の尾静脈注射を行い、注射された細胞の分布を脊髄と脳領域に特定しました。

別の実験では、研究者は筋ジストロフィーの動物モデルに蛍光タグ付き筋芽細胞を筋肉内に注射しました。その後、幹細胞の移植成功を分析するために生物発光を行いました。最後に、注射を使用して動物モデルを生成することもできます。これらの科学者たちは、強力な肝臓毒素であるジメチルニトロソアミンを雄のWistarラットに腹腔内注射して、肝線維症の動物モデルを作成し、肝臓疾患の発症を研究するために使用しました。

JoVEの化合物投与に関する第1回では、一般的に使用されている非経口注射について解説しています。最適な送達ルートは、注入された溶液のpH、容量、粘度など、いくつかの要因に基づいていることを忘れないでください。また、各手法には長所と短所があり、実験的なニーズに関連して考慮する必要があります。いつものように、ご覧いただきありがとうございます!