化合物の管理 IV

心内、レトロオービタル、フットパッドは、生物医学研究者がこれらの非定型ルートを介して化合物を送達する必要がある実験に使用する特殊な注射方法の一部です。

心臓内注射により、化合物が左心室に送達され、物質が直接動脈循環に入ることができます。レトロオービタルルートは、尾静脈注射の代替手段であり、化合物を静脈循環に送達するために使用されます。また、フットパッド注射では、動物の後足に物品を皮下投与します。このビデオでは、これらの特殊な注入技術の考慮事項、手順、およびアプリケーションについて説明します。

まず、これらの管理手順を開始する前に考慮すべき背景情報と考慮事項から始めましょう。

心臓内投与は、多くの場合、超音波を使用して針を心臓の正しい位置に誘導することによって行われます。ただし、適切なランドマークを利用して正しく実行すれば、超音波視覚化を使用せずに投与を行うことができます。この手順では全身麻酔薬を使用する必要があり、生存手順では動物ごとに1回の注射のみが許可されていることに注意してください。一般に、この注射には27〜30ゲージの針が使用され、最大投与量はマウスとラットでそれぞれ100マイクロリットルと300マイクロリットルです。

レトロ眼窩ルートによる静脈内注射の場合、眼窩静脈構造をしっかりと理解している必要があります。マウスには、いくつかの静脈、つまり眼窩上静脈、背側鼻静脈、下眼瞼静脈、および表在性側頭静脈が収束する副鼻腔があります。一方、ラットでは、いくつかの静脈のネットワークまたは神経叢があります。注射は副鼻腔または神経叢に直接行われます。心臓内と同様に、この手順も全身麻酔を使用する必要があり、1日1回の注射のみが推奨され、生存手順のためには1つの目につき合計2回の注射が推奨されます。すべての注射と同様に、最小サイズの針を選択する必要があります-一般的には27-30ゲージ-そして推奨される最大容量は150ですか?片目あたりL。

論争にもかかわらず、フットパッド注射の使用は、通常、炎症と腫瘍の成長に関連するいくつかの研究で依然として必要です。注射は片足でしか行えず、両側では行えないことに注意してください。また、フットパッドの測定は、明らかな腫れが発生したらすぐに毎日行う必要があります。注射には29-30ゲージの針が推奨され、推奨される最大容量は50μLです。注射後、すべての動物は、痛みの兆候、食物摂取のレベル、および正常な歩行について綿密に監視する必要があります。一般に、病変または腫瘍が動物の歩行能力または食物および水に到達する能力を妨げる場合、動物は安楽死させなければなりません。

それでは、心臓内注射から始めて、注射の手順を学びましょう。マウスでの手順を示しますが、ランドマークとラットのプロトコルは似ています。

最初のステップは、シリンジを準備することです。マウスには29ゲージの針と1ccの注射器が適切であることを思い出してください。また、心臓内注射の最大容量は100マイクロリットルです。溶液を引くときは、プランジャーと射出材料の間に少量の空気を残してください。これは、血液が心臓に配置されるときにシリンジに入ることを可能にするためです。

まず、吸入麻酔薬または注射麻酔薬を使用して動物に麻酔をかけます。全身麻酔を維持するための考慮事項については、このコレクションの別のビデオで確認してください。次に、動物を断熱されたプラットフォーム上の背側横臥位に置きます。次に、前肢をプラットフォームにテープで固定し、腰の上の腹部にテープを水平に貼り付けます。これは、動物をさらに安定させ、針が挿入された後の動きを避けるためです。次に、綿棒を使用して、動物の胸を70%アルコールで濡らします。

注射部位を特定するには、まず剣状突起と胸骨の下骨を見つけます。次に、2 つのランドマークの中間点を見つけます。このポイントの左1〜2mmが針挿入の目印です。綿の先端のアプリケーターを使用して、ポビドンヨードを塗布して針の挿入部位に印を付けます。

注入するには、針をテーブルに対して垂直に向け、約2mmの深さまで挿入します。次に、プランジャーにごくわずかな背圧をかけます。真っ赤な酸素化された血液がシリンジハブに入るはずで、適切な配置が確認されます。シリンジを同じ場所に保持し、30〜60秒かけてゆっくりと着実に材料を注入します。急速な注射は、細胞の凝集や動脈の詰まり、物質の温度が体温よりも大幅に低いことによるシステムへのショック、または心室の拡張と心臓のリズムの乱れを引き起こす可能性があります。

材料がシリンジから出たら、心筋を損傷する可能性があるため、横方向の動きをせずにゆっくりと慎重に針を取り外してください。次に、すぐに前足と腹部からテープをはがし、動物をうつ伏せの位置にして、断熱層として機能するのに十分な深さの寝具を備えた清潔なケージに置きます。このリカバリーケージの半分は熱源上にあり、麻酔をかけた動物はケージの加熱側に位置していることに注意してください。これにより低体温症が予防され、動物が麻酔から回復すると、必要に応じて加熱された側から離れることができます。

次に、ラットの眼窩後神経叢を利用した静脈注射の方法を学びましょう。ここでも、マウスでの手順を示しますが、ラットのランドマークとプロトコルは似ています。

選択したシリンジに適切な針を取り付け、注射材料を充填します。一般的には、27-30ゲージの針を使用し、シリンジは可能な限り小さく、最大容量は150マイクロリットルであることを忘れないでください。

手順を開始するには、まず動物に麻酔をかけます。次に、横方向の横臥位で平らな面に置きます。次に、人差し指を頭のてっぺんに、親指を顎に置き、ゆっくりと後ろに引っ張ります。これは、皮膚を引き締め、眼球を突き出すためです。気管に圧力がかかったり、空気の流れを制限したりしないように注意してください。複数回の注射を計画している場合は、テトラカインやプロパラカインなどの局所眼科麻酔薬を塗布してください。

針を目の内側眼瞼に45で挿入しますか?鼻に対する角度。深さは、結膜組織を貫通し、眼窩と副鼻腔に進むのに十分でなければなりません。眼窩の後ろで骨にぶつからないようにする必要があります。血管の破裂を防ぐために、挿入後の針の動きが最小限であることを確認してください。吸引すると血管が崩壊しますので、吸引しないでください。ゆっくりと着実に記事を注入します。次に、針を静かに引き抜き、目に軽い圧力をかけて出血を抑え、止血を行います。

最後に、マウスとラットにおけるフットパッドの注入方法についておさらいしておきましょう。まず、適切な針を取り付け、シリンジに正しい量を入れます。この手順は、意識のある動物で行うことができます。

動物を拘束チューブに入れ、片方の後足を分離して伸ばし、窒息物の上の皮膚をつかみます。注射する前に、水またはアルコールで足を拭いて破片を取り除きます。足の長さを走る血管を避けるために、注射のランドマークは中央にありますが、正中線のすぐそば、つま先の近くにあります。

針を注入部位に斜角にして置き、かかとに向けます。.足の組織の急激な膨張を避けるために、物品をゆっくりと着実に注入します。これにより、注入材料がその皮下スペースを埋めるときにフットパッドが腫れます。小動物の足では、注射による腫れはかかとにまで及ぶことがありますが、大きな動物ではより局所的です。

注射後、動物を毎日観察し、持続的な腫れが存在する場合、または実験プロトコルの結果として病変や腫瘍がある場合は、キャリパーを使用してフットパッド測定を行います。この装置は、足の厚さをミリメートル単位で測定し、腫れの定量化に役立ちます。

それでは、心内注射、レトロ眼窩注射、フットパッド注射を利用した実験の例をいくつかご紹介します。

心臓内投与の多くの応用の1つは、がん転移の動物モデルの開発です。ここでは、研究者はこのルートを使用して、骨コロニー形成の傾向を持つ腫瘍細胞を注入しました。その後、X線と蛍光イメージング技術を用いて骨の腫瘍増殖を研究しました。別の研究では、レトロオービタルルートを使用して、好中球を標識する特異的抗体を注入しました。その後、生体内イメージングの助けを借りて、科学者たちは標識された細胞の移動パターンを追跡することができました。

最後に、研究者はしばしばフットパッド注射を使用して炎症反応を分析します。この実験では、研究者はヒトの血液サンプルから末梢血単核細胞を単離し、それらを異なるテスト抗原と混合して、溶液を動物のフットパッドに注入しました。最後に、彼らは足の測定を行い、さまざまな抗原による腫れの反応を定量化しました。

JoVEの最終回では、通常の特殊な化合物投与技術についてご覧になりました。

要約すると、最初の部分では、最も一般的な非経口ルートをレビューしました。第2章では、経腸および局所的処置について説明しました。第3回では、新生児の皮内、鼻腔内、頭蓋内などの非定型手術の最初のセットを扱いました。最後に、ここでは、生物医学研究者が特定の目的のために研究室で使用する3つの追加のルートについて説明しました。

このシリーズを見た後、さまざまな投与技術についてはるかによく理解し、これらの化合物投与のプロトコルに関連する一般的および特定の考慮事項も知っておく必要がありますいつものように、ご覧いただきありがとうございます。