基本的なケア手順

生物医学研究に使用される動物の90%以上をマウスとラットが占めているため、これらの生物を適切に管理することは実験の結果にとって重要です。これらのケア手順は、輸送用コンテナから動物を開梱することから始まり、ケージの交換、適切な飼育条件の維持、適切な食事の提供、適切な環境の確保まで、さまざまな作業が始まります。実験室のマウスやラットの大部分に適用される一般的な手順がありますが、免疫不全の動物など、実験目的で維持するために追加の注意力を必要とする動物もいます。

このビデオでは、免疫適格動物と免疫不全動物の両方の標準と基本的なケア手順について説明します。そして最後に、科学者がこの知識をさまざまな研究目的でどのように使用しているかを示す実験の例をいくつか紹介します。

他の施設から動物を受け入れると、輸送中に輸送ボックスが病原体と接触する可能性があるため、施設内にすでに収容されている動物にリスクが生じます。したがって、輸送用コンテナを開梱する際には、適切な手順を採用する必要があります。

動物を取り扱う前に、適切な個人用保護具(PPE)を着用することが重要です。着用する最低限のPPEは、白衣、手袋、安全メガネ、およびほこりやアレルゲンへの曝露を減らすサージカルタイプのマスクです。次のステップは、入ってくる動物に適したケージを選択することです。次に、ケージに適切な寝具とネスティング材を提供します。そして、準備したケージを温度管理された受け入れ室に持って行き、動物が到着する前に移動の準備ができていることを確認してください。

荷物が到着したら、輸送ボックスを受取室の安全な場所に置いてください。容器に損傷がないか調べ、外面を消毒して有害な病原体を破壊します。メーカーの推奨に従って、消毒剤が少なくとも15〜30分間ボックスに接触していることを確認してください。次に、コンテナをアニマルトランスファーステーション(ATS)に入れます。このステーションは、フード内に高効率微粒子空気(HEPA)のろ過された一方向気流を提供します。HEPAは、ユーザーをアレルゲンから保護し、周囲の室内空気から動物を保護し、汚染の可能性を最小限に抑えます。次に、輸送用コンテナを開き、げっ歯類の全体的な健康状態を評価します。怪我や病気のように見える動物に注意してください。その後、それらを適切なグループサイズで組み立て済みのケージに入れ、ケージをワイヤーバーの蓋で覆い、仕切りを固定して2つの領域を作成します。適切な食品を選択して片側に置き、もう片側を開いたままにして、空気の循環を良くします。最後に、動物が自動散水を備えたラックに配置されていない場合は、十分な水供給を確保するためにウォーターボトルを追加します。ATSは各セッションの終了時に消毒する必要があり、消毒するときはブロワーをオフにする必要があることを忘れないでください。

ケージを交換するには、2つのケージ(適切な寝具材料を含む新しいケージと、動物と一緒に使用済みのケージ)をATSに配置します。古いケージから新しいケージに動物を手で移すか、パッド入りの鉗子を使用して移すことができます。これらの方法の両方については、このコレクションの別のビデオで説明されています。一度に開けることができる動物のケージは1つだけであることを忘れないでください。雄のマウスまたは同腹仔を持つ雌の場合、マウスの営巣領域を清潔なケージに移すことで、動物が移行を支援することが実証されています。ケージトップを新しいケージに置いたら、古いケージトップから新しいトップにフードを移し、必要に応じてさらにフードを追加します。次に、バリアトップを置き、ケージをラックに戻します。ケージ間またはグループ間でグローブを交換することをお勧めします。

免疫不全の動物の開梱手順は少し異なり、無菌である必要があるためです。フード内のブロワーは、使用の少なくとも24時間前にオンにすることをお勧めします。免疫依存性の動物と同様に、出荷到着時に容器に消毒液を注入し、15〜30分間未開封のままにします。免疫不全マウス用に指定されたATSで、動物を操作する30分前に層流フードに70%エタノールを噴霧します。この開梱作業には、2人が参加するのが理想的です--1人は、蒸気滅菌ガウンと2組の滅菌手袋を着用して無菌技術を使用して動物を取り扱う滅菌技術者であり、もう1人は、汚染されたアイテムを処理するための清潔な隔離ガウンと手袋を着用した非滅菌技術者です。どちらもマスク、ヘアボンネット、安全メガネを着用する必要があります。

ボンネットの内側に輸送用コンテナを開ける前に、すべての消耗品とケージをこれらに入れ、外側にアルコールをスプレーします。そして、荷物が到着したら、受け取った動物の箱をフードに入れ、70%のエタノールもスプレーします。滅菌ケージには、包装して蒸気滅菌した標準ケージと、ベンダーが照射して滅菌した使い捨てユニットの2つのオプションがあります。

無菌食品を開封し、続いて輸送ボックスを開けることから開梱手順を開始します。この時点で、ハンドラーは滅菌手袋の最初のペアを廃棄する必要があります。次に、非滅菌者が滅菌ケージを開封し、無菌的に動物ハンドラーに渡します。動物ハンドラーはボンネットとワイヤーバーの蓋を取り外し、フードに逆さまに置きます。その後、ケージのシッパーチューブは、フードにあるステーションで水で満たされます。最後に、動物ハンドラーは動物をケージに入れ、ワイヤーバーの蓋で固定し、餌を追加し、ボンネットを所定の位置に置きます。フードブロワーは、無菌環境を維持するために常にオンにしておく必要があることに注意してください。最後に、非滅菌者は、装着されたケージをフードから取り外し、適切なラックに置きます。グループ間の相互汚染を避けるために、動物取扱者は各輸送コンテナの後に手袋を交換する必要があります。

免疫不全動物のケージ交換の場合、フードとケージ、およびPPEの準備は、これらの動物の開梱の場合と同じです。そして、移植技術は免疫適格動物と同じですが、無菌条件下で行われます。

それでは、動物たちにとって適切な住居環境についてお話ししましょう。これは、エッセンシャルケアを提供するもう一つの重要な側面です。マウスとラットは、主に靴箱タイプのケージに収容され、底には寝具材料が入っています。一般的なマウスケージは75平方インチの床面積を提供し、これは最大5匹の成マウスに適しています。一方、ラットケージの面積は142平方インチで、2匹の成体ラットに適しています。静的ケージは通常、ワイヤーバーの蓋で覆われ、フィルター材料はボンネットとしてケージの上部に追加されます。個別換気ケージ(IVC)にもワイヤーバーの蓋とボンネットがありますが、ケージに空気が流れるラックに配置されます。これにより、静的ケージと同じくらい頻繁にケージを交換する必要がなくなり、免疫不全の動物にとって有益である可能性があります。

すべてのケージシステムには、食料と水の供給のための設備があります。動物用ケージ内にフィーダーが配置されているか、ワイヤーバーの蓋の一部が食品の保管に使用されます。食べ物は動物に汚れないように置かなければなりません。水は通常、ケージの上部に配置されたウォーターボトル、または動物ケージに組み込まれている自動散水飲用バルブを介して供給されます。飲用バルブオプションの場合、ケージがラックにかみ合っていると、水がチューブに運ばれ、動物施設全体の動物のニーズを満たすように設計された自動散水システムになります。

実験動物の手入れと使用に関するガイドには、すべてのケージ用具は少なくとも2週間ごとに消毒しなければならないと記載されています。一部のケージやアクセサリーは、エンクロージャー内の臭気やアンモニアのレベルに応じて、より頻繁に交換する必要がある場合があります。

それでは、免疫適格動物と免疫不全動物のための適切な食物と水の供給について話しましょう。さまざまなタンパク質、炭水化物、および脂肪の組成を持つ多くの市販の飼料があります。理想的には、飼料は15〜19%のタンパク質、44%の炭水化物、および4〜9%の脂肪で構成する必要があります。免疫不全の動物の場合は、飼料が滅菌されていることを確認してください。

水道水、またはRO水である逆浸透膜は、免疫適格動物に使用できますが、免疫不全動物の場合、水は汚染源になる可能性があるため、滅菌する必要があります。水中の無菌性は、8リットルのRO水に2滴の12モル塩酸を加えることによって維持され、これにより水が2.5〜3のpHに酸性化され、細菌の増殖が制限されます。次に、個々のボトルに水を注ぎ、アルミホイルで覆います。シッパーチューブ付きのボトル蓋を別々にオートクレーブバッグに入れ、すべてをオートクレーブに入れて蒸気滅菌します。

それでは、動物の世話に不可欠な標準的な環境条件について説明しましょう。

ケージレベルでは、科学的に正当化されない限り、または動物が他のすべての動物と互換性がない場合、社会住宅は必須です。紙の小屋や巣材で環境を豊かにすることで、動物は巣作りや穴あけなどの種特有の行動を示すことができ、その結果、ストレスレベルが減少し、動物の全体的な健康状態が向上します。ネスティングマテリアルは、同じケージ内の複数のオスマウスの収容を助ける心を落ち着かせるフェロモンで飽和した睡眠エリアも提供します。前述のように、ケージの変更時に営巣地を清潔なケージに移動すると、動物が新しい環境に導入されるため、特にオスの攻撃性を防ぐことができます。無年齢の裸の動物の場合、体温調節を助けるために、ケージに追加の寝具と細断された紙タイプの巣材を提供することを検討する必要があります。

部屋レベルでは、マウスとラットの温度は68〜79の間である必要がありますか?F.部屋の湿度レベルは30〜70%にする必要があります。レベルが低いと、リングテイルと呼ばれる状態になる可能性があるためです。3番目の部屋のパラメータは照明です。これには、光の強度とサイクルが含まれます。通常、アニマルルームは12時間の明かり/12時間の暗さのサイクルに設定されています。照明の強度は、部屋での活動に応じて変化する必要があります。技術者が作業しているときは、より高い照明レベルを使用できます。ただし、すべての活動が終了したら、約325ルクスに下げる必要があります。最後に、室内の空気の流れも慎重に制御する必要があります。100%新鮮な空気の空気交換は、1時間に10〜15回行う必要があります。これにより、動物室内の微生物や臭いが減少します。

最後に、研究者が実験動物の住居、食事、環境の好みに関するこの知識を実験にどのように使用しているかを見てみましょう。

先に述べたように、実験動物は一般的に巣作り行動を示し、ストレスを軽減し、研究者はこれを動物福祉の指標として使用してきました。この特定の実験では、科学者は、構築された巣をスコアリングするための偏りのないシステムを開発し、それを使用して、巣の構築動作に対する周囲温度の影響を研究しました。ご覧の通り、気温の上昇はスコアの大幅な低下を引き起こし、動物福祉における周囲温度の役割を浮き彫りにしています。

マウスとラットが炭水化物を愛することを考えると、研究者は動物の運動機能をテストするためにさまざまな形状の飼料を使用してきました。これには、さまざまな種類の食品取り扱い作業中の器用さの分析や、外科的または薬理学的介入後の到達行動の調査が含まれます。

最後に、ネズミやラットは夜行性で、ライトアップされた場所を好まないことが知られています。科学者たちはこの知識を使用して、これらの種の不安を研究するための環境を構築します。例えば、ここでは、動物を単純な野外に導入し、野生型マウスとノックアウトマウスが内側と外側のフィールドゾーンで過ごした時間を調べ、遺伝子のノックダウンが不安様行動に及ぼす影響を分析しました。

JoVEのマウスとラットの基本的なケア手順の紹介を見ました。これらの動物の環境と取り扱いが動物の健康に害を及ぼさないようにするために取るべき対策について理解を深め、研究者がこれらのパラメータを変更してさまざまな科学的目標を達成する方法も知っておく必要があります。いつものように、ご覧いただきありがとうございます!