光学・共焦点顕微鏡による生体試料のイメージング

1. 共焦点イメージング

1. サンプルをステージにロードします。レンズの下の中央に配置します。これは、この場合は5キロである段階の重量制限を超えてはなりません。サンプルは100mm以下の厚さでなければなりません。
2. イメージングソフトウェアを開き、「ジョブの作成」を選択します。
3. [地形] 列で、アシスタント ボタンを選択します。
4. 最も低い倍率 2.5X で概要イメージを作成します。倍率を切り替える前に、鮮明な画像が表示されるまで Z 位置を変更して、サンプルにフォーカスがあることを確認します。これは、3D顕微鏡マニピュレータを押し下げたり引き上げたりすることで行うことができます。細かいZモーションは、エッジの周りに青色の光を引き起こす側面のボタンを係動することによって達成されます。
5. ゆっくりとレンズの倍率を上げ、光の強度と焦点で連続的に再生し、所望の倍率になるまで。必要に応じて、マニピュレータを使用してステージを x 方向と y 方向に移動して、別の対象領域を選択します。
6. 低倍率で概要画像を撮影したら、次のボタンを押して[参照ポイント]ステップに進みます。必要に応じて、測定のために特定の基準点(サンプルのコーナー)を指定しますが、この目的のためにデフォルトの基準点は問題ありません。
7. 次の矢印を押して、ウィザードの次の部分に進みます。
8. 必要に応じて目標を変更して、サンプルに適した解像度を確認します。この場合、50X対物レンズを使用してサンプル内の細胞を可視化します。50Xはサンプルに最も近いレンズなので、50X目標まで徐々に上がり、20Xレンズ後の作業距離を短くする余地があることを確認します。
9. [範囲定義の測定] ページで、Z 位置を少し移動し (マニピュレータのサイド ボタンをクリックして微調整します)、サンプルの一番上だけがフォーカスを合わせ、[最後に設定] をクリックします。次に、サンプルの一番下だけがフォーカスされるまで Z 方向(下向き)にステージを移動し、「最初に設定」を押します。計算されたスライスの数が 1000 を超えていないこと、またはプログラムが失敗することを確認してください。
10. 光の強度が、いずれかのレベルで画像内で過飽和(赤いピクセルを引き起こす)しないことを確認してから、ヒットを行います。これは、断層撮影画像を取り、断層撮影ソフトウェアを開きます。
11. 断層撮影ソフトウェアで、[スタディ]タブなどのタブを開いてデータを 3D で表示し、2D または 3D 空間で計測します。

2. デジタル光学顕微鏡イメージング

1. サンプルをステージにロードします。サンプルをレンズの下に中央揃えします。サンプル重量は、この場合は4キロである段階の重量制限を超えてはなりません。サンプルは12cm以下でなければなりません。
2. イメージング ソフトウェアを開きます。
3. 表示されるテンプレートの一覧からジョブを選択します。また、無料試験を押すことで仕事以外で仕事をすることも可能です。
4. ステージ全体を示す概要画像を取得します。これは、後で表示されているサンプルの一部を表示するマップとして機能します。画像を取得する際は、コントローラを使用してフォーカスと画像位置を変更します。
5. 座標系を配置します。既定の座標系はステージの左下隅から取得され、このアプリケーションでは問題ありません。サンプルが曲がっている場合は、ここで座標を調整できます。
6. サンプルとジョブに名前を付けます。
7. [取得] の下にあるカメラ ボタンを選択します。初期イメージを取得し、サンプルをナビゲートしながらライブ ボタンを押します。
8. サンプルに明らかに焦点が合うまで、フォーカスを下に移動します。[照明と絞り]タブの照明も調整する必要がある場合があります。
9. [画像の最適化] パネルのツールを使用して、イメージを最適化します。レンズの傾き、サンプルの照明レベル、明るさとコントラストなど、画像が目的の鮮明さを得るまで、さまざまなパラメータを使用して再生できます。
10. ソフトウェアの鉛筆ツールをタップして測定を実行します。そこから、距離、角度、面積など、複数の計測ツールにアクセスできます。距離ツールと面積ツールを使用して、サンプルのサイズを測定します。
11. [結果ワークフロー ] タブに移動し、ワークフロー レイアウトを確認してレポートのレイアウトを構成します。
12. 保存ボタンをタップしてジョブを保存し、他のユーザーが同じワークフローを使用できるようにします。