Name: マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 25 min 6 s
Description: 学ぶマウス網膜神経節細胞における遺伝子発現操作法。子宮内および生体外エレクトロポレーションを用いて、RGCの発達と機能特性への影響を研究する効果的なプロトコルを解説する。

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我々は、このプロトコルでのコメントの子宮内および ex vivo網膜エレクトロポレーション技術を、それぞれ、と博士は櫻井でのヘルプは博士リチャードヴァレとBrikhaシュレスタに感謝。この作品は、健康補助金の国立研究所F31 NS051008（超えないこと）、財団原子核Medicale、とヒューマンフロンティアサイエンスプログラム（AR）とR01 EY12736（CM）によってサポートされていました。

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Eye+Retina+and+the+Visual+Systems+of+the+Mouse%22">Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse</a>. Chalupa, L. M., Williams, R. W. , MIT Press. Cambridge. (2008).</li>
<li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li>
<li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li>
<li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li>
<li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li>
<li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li>
</ol>

このビデオでは、我々は胚のマウスRGCsへの遺伝子送達のために、両方の子宮内および ex vivoで 、エレクトロポレーション技術を実証している。 子宮内網膜エレクトロ RGCsでの遺伝子発現を操作するためのメカニズムを提供し、 生体内でその軸索突起を可視化する。胚は出生後に生き残るために許可すると、これらのGFP +彼らのターゲットにRGC突起、外側膝状核（LGN）の検査を可能にする。 エクスビボ網膜エレクトロポレーションは、in vitroでのアッセイで使用するために特定の網膜の領域を標的とするより多くの制御機能を提供します。 生体内で 、これらの技術から派生したin vitroの解析で組み合わせることで、それ以外の場合は、通常バックグラウンドでRGCsのサブセットでRGC開発と軸索突起の徹底した特性評価が可能になります。私たちのデモでは、視交叉でのRGC軸索誘導に焦点を当てているが、 子宮および ex vivo網膜エレクトロポレーションの両方は、そのような終了のゾーンにターゲティング遺伝子の発現の効果RGC分化、樹枝状形態、電気生理学的特性、シナプス形成と適切でどのように摂動を研究するための有益かもしれないLGNおよび上丘など。

<table><tbody><tr><td>BTX Electro Square Porator ECM 830（フットペダル付き）</td><td>Harvard Apparatus</td><td>450052</td><td></td></tr><tr><td>ラウンドピンセット電極</td><td>Nepa Gene</td><td>CUY650-5 or CUY650-7</td><td></td></tr><tr><td>シルク縫合糸</td><td>Henry Schein</td><td>101-2636</td><td></td></tr><tr><td>プランジャー付きガラスマイクロピペット</td><td>Drummond Scientific</td><td>5-000-1001-X10</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質・抗真菌剤</td><td>Invitrogen</td><td>15240096</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12培地</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8806-5G</td><td></td></tr><tr><td>ITSサプリメント</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-1884</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>メチルセルロース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0512</td><td></td></tr><tr><td>ガラスボトムマイクロウェルディッシュ</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>ポリ-L-オルニシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4957</td><td></td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

網膜とその唯一の出力ニューロン、網膜神経節細胞（RGC）は、このような細胞分化、軸索ガイダンス、網膜部位の組織とシナプス形成[1]のような生物学的疑問を調査するための優れたモデルを構成する。一つの欠点は、特にそうでない場合はアクセス可能なマウスの視覚的な経路で、効率的かつ確実にin vivoで RGCsにおける遺伝子発現を操作することができないことである。トランスジェニックマウスは、遺伝子発現を操作するために使用されますが、このアプローチは、しばしば時間がかかり高価であり、そして望ましくない副作用を作り出すことができることができます。ひよこでは、OVOエレクトロポレーションで網膜とRGCの開発を検討するためRGCsにおける遺伝子発現を操作するために使用されます。同様のエレクトロポレーション技術は、新生児マウスの仔で開発されているが[2]、成体ラット[3]、およびin vitroでの胚のマウス網膜[4]、これらの戦略はいずれもin vivoで RGC開発と軸索突起の完全な特性評価を可能にしない。この目的のために、我々は、特に胚のマウスRGCs [5、6]ターゲットに、エレクトロポレーションの2つのアプリケーション、 子宮やその他のex vivoでの 1つを開発した。 子宮内網膜エレクトロポレーションに使用すると、我々のような、misexpressまたはダウンレギュレートするRGCsで特定の遺伝子をし、in vivoでの視覚経路を介して、その軸索突起に従って、このような視交叉などの中間目標、時、または対象地域での指導上の意思決定の検査を可能にすることができます外側膝状核。そうでなければ、野生型バックグラウンドでRGCsのサブセットの遺伝子発現を乱すことはレチナール経路全体の遺伝子機能の理解を容易にします。さらに、我々はin vitroで RGC軸索の成長を分析するためのコンパニオンの技術を開発しました。我々は、胚の頭部ex vivoでのエレクトロ全網膜を収集し、インキュベートして、後でこれらの網膜、数日間から外植片を準備する。網膜外植片は、指導の手がかりやその他の要因へのエレクトロポレーションRGC軸索の応答を調べるために、in vitro試験の用途に使用できます。合計では、技術のこのセットはmisexpressまたはダウンレギュレートする遺伝子をRGCsで、大幅RGC開発と軸索突起を調べる研究を支援する必要が我々の能力を高める。

ここではでマウス網膜神経節細胞（RGCs）で遺伝子発現を操作するための2つのテクニックを紹介<em&gt;子宮内で</em&gt;と<em&gt;生体外で</em&gt;エレクトロポレーション。これらの技術は1つが遺伝子発現の変化は、RGC開発、軸索ガイダンス、および機能特性にどのような影響を与えるか調べることができます。

網膜およびその唯一の出力ニューロンである網膜神経節細胞（RGC）は、細胞の...といった生物学的な問いを検証するための優れたモデルを構成しています。

子宮内網膜エレクトロポレーションは、麻酔をかけた妊娠13.5日から14.5日の母マウスの腹部を切開し、胚を露出させることから始まります。胚の片側の網膜にDNAを注入し、頭部にエレクトロポレーションを行うことで、RGC前駆細胞にDNAを導入させます。妊娠18.5日に胚を灌流させると、GFP陽性となります。X vivo 網膜エレクトロポレーションのため、網膜および視覚投射を解析します。胎生 13.5日から14.5日の頭部をディッシュ内で背面を上に向け固定し、両側の網膜の背面周辺領域にDNAを注入し、続いてエレクトロポレーションを行います。網膜全体を40時間培養した後、GFP陽性の網膜外植片を播種し、in vitro 培養アッセイを行います。こんにちは。コロンビア大学病理学・細胞生物学・神経科学科のCarol Mason博士の研究室のTim Petrosです。本日は、子宮内およびex vivo網膜電極導入法を用いて、胚性網膜に遺伝子を導入する方法をご紹介します。私たちの研究室ではこの手法を用いて、遺伝子発現の操作が網膜神経節細胞にどのような影響を与え、特に視交叉における投射経路がどのように変化するかを研究しています。それでは、始めていきましょう。子宮内網膜電穿孔法を行う前に、適切な準備が不可欠です。器具や装置の麻酔下滅菌、注入用DNA溶液および術後の抗生物質・抗真菌剤溶液の調製、手術部位の準備、および適切な溶液の加温に関する詳細については、書面によるプロトコルを参照してください。手術の前に、マイクロ電極プラーを用いて先端を細くしたマイクロピペットを準備しておきます。チップを折って、子宮内電接法（in utero electroporation）に適した角度のある先端を作成します。まず、胚齢 E 13.5 から E 14.5 の妊マウスの腹腔内に、麻酔混合液 0.15 milliliters を注入します。マウスが完全に麻酔状態にあるかを確認するまで、3分から7分かかります。後肢をつまみ、動物が麻酔に屈している間に反応がないことを確認します。DNA溶液を少量切り出し、5 µLをパラフィルム上にピペットで滴下します。金属製のワイヤープランジャーを90度に曲げて、引き伸ばしたマイクロピペットに挿入し、プランジャーを使用してDNA溶液をマイクロピペット内に吸引します。次に、マウス胚を外科的に露出させます。適切な手技については、Wal InusらによるJoVEプロトコルを参照してください。これでエレクトロポレーションの準備が整いました。最初のステップは、網膜を適切に定位させることです。次に、網膜にDNAを注入し、その後、頭部に電気穿孔を行います。それでは、始めていきましょう。まず最初のステップとして、このように網膜が上を向くように配置します。次に、マイクロピペットを用いて羊膜を貫通させ、理想的にはDNAを直接網膜内に注入します。子宮壁を貫通させたら、プランジャーを押し下げてDNAを網膜内に注入し、その後プランジャーを引き戻します。したがって、DNAを注入すると、緑色の染料が羊水と網膜に充填されているのが確認できるはずです。さて、注入が完了しましたので、エレクトロポレーションを行います。エレクトロポレーションを行うには、胚の周囲にエレクトロポレーション用パドルを配置し、正極側のパドルをエレクトロポレーションを行う網膜に隣接させます。準備が整ったら、足踏みスイッチを押し、胚に電流を流します。負極のパドルに気泡が発生しているのが確認できれば、エレクトロポレーションが成功したことを示しています。この手順をすべての注射済み胚に対して繰り返します。以上が、1つの胚性網膜にDNAをエレクトロポレーションする方法です。この手順は、必要に応じて任意の数の胚に繰り返し行うことができます。ただし、エレクトロポレーションを行う胚の数が増えるほど、母親が胚を吸収（流産）させる可能性が高くなることに留意してください。胚の電気泳動後、胚を戻したところで、指を使って胚の連なりを母体内に戻すようにマッサージします。抗生物質・抗真菌剤溶液を約2 mL、腹腔内に注入します。止血鉗子とピンセットを使用し、切開部の前方部分を二重結節で縫合し始め、切開部の後方部分まで単純連続縫合で縫い合わせます。最後のループを使用して縫合糸を結び、余分な糸を切り揃えます。最後に、ステープラーで切開部を閉じます。この操作を行うには、鈍的鉗子で切開部の前方部分の皮膚を持ち上げます。皮膚と腹膜を確実に分離させてください。次に、ステープラーの歯を皮膚に当て、ステープラーを押し下げながら切開部を後端に向かって順次ステープルで閉じます。通常、5〜7個のステープルが必要です。ステープリングが完了したら、ステープルの周囲の創傷部位をアルコールパッドで拭いてください。親マウスをヒーティングパッドの上で回復させ、その後、新しいケージに移します。親マウスが痙攣し始め、転がり始めると、通常15～90分で覚醒しますが、痛みと不快感を最小限に抑えるようにします。親マウスには、覚醒時およびその後の時点でブプレノルフィンを投与します。不快感により脱水症状が防げない場合は、術後約2〜4時間に、生理食塩水1 mLを母体に皮下注射してください。術後24時間が経過すると、母体は通常の行動を取り戻し、規則的に飲食物を摂取するようになります。解析のため、E 18.5にエレクトロポレーションを施した網膜を採取します。あるいは、母親に分娩させ、出生後の網膜を採取して後日の解析に用いることも可能です。動物を麻酔した後、ステープルの下の皮膚と腹膜をハサミで切開します。腹腔と子宮角を露出させ、エレクトロポレーションを施した胚を取り出し、胚の肢を介して解剖皿に腹側を上にして固定します。腹壁の皮膚と腹膜を切開し、さらに肋骨の側方を切開して心臓を露出させます。次に、灌流針を左心室に刺し、マイクロ鋏で右心房を切断します。ここで灌流を開始し、PFAを約60〜90秒間流します。正しく行われていれば、右心房から血液が流出し、胚が蒼白になります。灌流が完了したら、胚を断頭し、15 mLコニカルチューブに入れた4% PFAで頭部を回収します。この手順を、エレクトロポレーションを行ったすべての胚およびすべての母マウスに対して繰り返します。すべての胚の回収が完了した後、母マウスを頚椎脱臼により安楽死させます。頭部を4% PFAに浸し、4°Cで一晩固定します。その後、PBSで数日間洗浄してください。PBSでの洗浄後、GFPが正常に発現しているか、網膜の観察が可能になります。まず、解剖皿に頭部を固定し、網膜を上に向け、PBSに浸します。26.5ゲージの針を用いて、網膜周囲の皮膚を取り除き、網膜色素上皮（RPE）を露出させます。レンズと網膜色素上皮（RPE）の接合部にある腹側網膜を穿刺します。次に、マイクロシザーの一方の刃をこの穴に挿入し、腹側網膜から視神経円盤まで垂直に切開します。これにより、網膜を取り出す際に方向を確認することができます。1対のピンセットで腹側切開部のRPEを掴み、網膜からRPEを分離します。もう1対のピンセットを使用して、RPEが強固に付着しているRPEと水晶体の接合部から、RPEを網膜から剥離させます。RPEを除去した後、ピンセットで水晶体を掴み、上方に引き離します。レンズを除去するには、ピンセットを網膜の下に差し込んで慎重に網膜を取り出し、視神経乳頭を挟んで網膜を切り離します。最後に、網膜をPBSを満たしたウェルに移します。どの網膜がどの個体由来であるかを必ず記録してください。対側網膜および他のすべての電気穿孔済み胚に対しても、これらの手順を繰り返します。蛍光解剖顕微鏡を使用してすべての網膜をスキャンし、GFP陽性の網膜を確認します。GFP陽性であれば、その胚において電気穿孔が成功したことを示しており、その網膜および対応する脳をさらなる解析に供することができます。ex vivo 網膜エレクトロポレーションの手順では、in utero エレクトロポレーションとは異なる、いくつかの追加的な準備ステップが必要です。無血清培地の調製および酸素供給、ならびに培養ディッシュおよび境界アッセイの準備に関する詳細な情報は、書面によるプロトコルを参照してください。動物を麻酔した後、既報の手法に従って腹腔を開き、胚の鎖全体を取り出して、氷上の D-M-E-M-F 12 に置きます。その後、母マウスを頚椎脱臼により安楽死させます。鋏を用いて子宮壁を切開し、羊膜から胚を取り出してD-M-E-M-F 12に回収し、氷上で保持します。胚を斬首し、DMEA培地中で氷上に保持し、体部は廃棄して構いません。次に、口ピペットまたはプランジャーピペットを用いて、マイクロピペットに必要量のDNA溶液を充填します。次に、1個体をPBSを入れた解剖皿に移し、頭部を背側が上になるようにピンで固定します。その後、注入操作を行うために解剖顕微鏡へ移動します。それでは、電気穿孔法（エレクトロポレーション）の準備が整いました。両側の網膜背側周辺部にDNAを注入し、その後、頭部に電気穿孔を行います。それでは、開始します。最初のステップは、網膜上の皮膚を取り除くことです。そのために、ピンセットを使用して皮膚を剥がします。これで、両方の網膜の背側部分が見えるようになります。次に、両眼の網膜色素上皮層の直下にDNAを注入します。そのために、電極をほぼ水平に保持し、網膜の最外側背側部にあるRPEを貫通させます。緑色の色素が網膜腔を満たし、PBS溶液へと漏れ出すのが確認できるはずです。それでは、エレクトロポレーションを行います。まず、頭部のピンを外します。次にパドルを配置しますが、陽極パドルが頭部の腹側にくるようにします。頭部をパドルに挟み込み、腹側に陽極パドルを配置して、このようにパドルを固定するために圧力をかけます。そして、電気穿孔を行います。パドルと頭頂部に気泡が発生しているのがわかります。これで完了です。次に、頭部を培地が入ったディッシュへ移動させます。以上が、ex vivo 網膜エレクトロポレーションの手順です。この手順を、希望する胚の数およびDNA条件の数だけ繰り返します。次に、網膜を培養する準備を行います。すべての電泳準備が完了したら、4ウェルディッシュに酸素飽和させたSFM溶液を約1.5 milliliters加え、氷上に保持します。注入する各異なるDNA溶液に対して、1つのウェルを用意します。次に、エレクトロポレーションを施した個体を、D-M-E-M-F 12が入った解剖皿に移します。この際、網膜を上向きにし、腹側網膜または標的領域の反対側を上にしてください。精密ピンセットを使用して、RPEを挟んで穴を開けます。この穴を起点として、網膜の周囲からRPEを剥離させます。インキュベーション中に網膜が自己崩壊するため、眼球を切断したり損傷させたりしないでください。RPEを除去した後、ピンセットで視神経の基部をつまみ、網膜を押し出して取り出します。この際、水晶体はそのまま残してください。取り出した網膜を、4ウェルディッシュ内の酸素供給されたSFMに移します。頭部を反転させ、反対側の眼でも同様に網膜の除去を行います。すべての電気穿孔した頭部でこの手順を完了し、酸素化したSFM中で網膜を37°Cで40〜48時間培養します。網膜全体の培養後、酸素化したSFMが入ったウェルから、D-M-E-M-F 12を入れたペトリ皿の蓋に網膜を移します。蛍光解剖顕微鏡を用いて網膜を1つ選び、GFP陽性に発現している網膜部位を可視化します。次に、マイクロスカルペルとピンセットを使用して、GFP陽性でない網膜部分を切り出し、除去して、GFP陽性の網膜断片のみが残るようにします。解剖の間、蛍光光と通常光を随時切り替えて確認すると効果的です。GFP陽性の網膜を特異的に選択するため、GFP陽性の網膜片をG-M-E-M-F 12が入ったウェルに移します。1つのウェルから採取したすべての網膜についてこの手順を繰り返します。DNAの各条件ごとに新しいペトリ皿とD-M-E-M-F 12培地を使用し、これらのGFP陽性の網膜片を、播種用にさらに小さな網膜エクスプランに切り出します。解剖顕微鏡を用いて、GFP陽性の大きな網膜片をマイクロメスで小さなエクスプランに切断してください。エクスプランの長さと幅は、約200から300 micrometersにしてください。GFP陽性の網膜組織片1つから、約4〜10個のGFP陽性網膜外植片が得られるはずです。すべての外植片をD-M-E-M-F 12を含むウェルに回収してください。採取したすべてのGFP陽性網膜領域に対してこの手順を繰り返します。すべてのGFP陽性網膜外植片を準備した後、ラミネートコーティングされた培養皿に、冷やした0.4%メチルセルロース含有SFMを250 µL加えてください。次に、GFP陽性の外植片を4〜8個、培養皿に移し、ピンセットを用いて、各外植片が皿の中心と端の中間点に位置するように多角形に緩やかに配置します。外植片のどちら側がRGC層であるかを確認します。これは、外 retinal 層に付着していることがあるRPE結晶を探すことで判断でき、その反対側がRGC層であることを示しています。RGC側には通常、いくつかの細胞碎片が付着しており、これがRGC層を下にした状態での適切な展開を助けます。ピンセットを使用して、展開片の中央をしっかりと押し付け、培養皿底面のガラスカバースリップに密着させます。すべてのX個の展開片を培養皿に播種した後、37 °Cのインキュベーターに移します。網膜X外植片は24時間後に豊富な軸索伸長を示し、多くのin vitroアッセイに使用することができ、その後4% PFAで30分間固定します。そして、境界アッセイのために免疫染色を行います。4G FP陽性の外植片を、境界アッセイ用に準備したディッシュに移します。X 個の外植え体を、目的の基質の蛍光境界線に沿って直線状に並べます。蛍光解剖顕微鏡下でピンセットを用い、外植え体を蛍光境界線から約 50 to 150 micrometers の距離に配置します。その際、2つの蛍光チャンネルを交互に切り替えて、緑色の外植え体と赤色の境界線を視認してください。次に、ディッシュを37 °Cで24時間インキュベートし、RGC軸索が境界基質に到達するまで十分な時間を置きます。その後、X explanを4% PFAで30分間固定し、続いて免疫染色を行います。これは子宮内網膜電穿孔法に続いて実施します。網膜のホールマウント標本を作成することで、網膜内のGFP陽性RGCを半保持状態で可視化できます。視覚系全体の標本を作成することで、視神経、視交叉、および視索にわたるGFP陽性軸索を可視化できます。あるいは、網膜およびRGC経路に沿って前頭方向から凍結切片を作成し、網膜内のGFP陽性RGC細胞体、および視神経、視交叉、視索内の軸索を可視化・解析することも可能です。すべての網膜軸索は、ニューロフィラメント染色によって可視化されます。さらに、子鼠をP4からP10で採取することにより、in utero electroporationを用いて外側膝状体（LGN）におけるRGC軸索の標的形成を研究することができます。P8において、ex vivo electroporationおよび網膜インプラントの移植後、同側網膜に注入したCTB LOR 5 94（赤色チャネル）および対側網膜に注入したCTB 6 47（青色チャネル）によってRGC投射全体が標識され、LGN内でGFP陽性軸索が観察されます。RGC軸索の一部はRGFP陽性であり、上図（低倍率）および下図（高倍率）に見られるように、低倍率と高倍率の両方で明確に可視化できます。GFP陽性軸索の応答は、ここに青色で示されている様々な基質の境界に隣接してXSを播種することで分析可能です。以上で、in uteroおよびex vivo網膜エレクトロポレーションを利用して、胚性ミラーリング網膜に遺伝子を導入する方法について説明しました。本解析では視交叉の軸索誘導に焦点を当てましたが、この手法は、網膜神経節細胞（RGC）の分化、樹状突起の形態、および電気生理学的特性を研究される方にとっても有用であると考えられます。本手順を実施する際は、DNA注入時の網膜への損傷を最小限に抑えること、また実験を通して胚を常にPBSで保湿することを忘れないでください。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

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