Name: の電気生理学的記録ショウジョウバエ胚 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: 学ぶショウジョウバエ胚の電気生理学的記録法。全細胞パッチクランプと吸引電極を用いて、神経筋接合部と中枢シナプスの発達を解析し、シナプス伝達の機能的理解を深める。

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ショウジョウバエの胚からの電気生理学的記録は、マニュアル操作と解剖が必要になります。準備の健康、およびレコーディングの結果としての品質は、迅速かつきちんと記録するための脆弱な胚組織を準備するためにできることつに依存し、実験を実行してください。実験者は、一度に両方に取り組むしようとする前に胚の解剖とパッチクランプ電気生理学の両方を習得している必要があります。 録音は&quot;変更された標準&quot;または&quot;体液のような&quot;（HL）サランのいくつかの種類の一つで行うことができます。これら二つの生理食塩水のクラスの主な相違点は1）のNa +濃度（70 mMのHL対120から135 mMの標準）と2）のMg 2 +濃度（4mMの標準対20 mMのHL）。標準溶液の高いNa +濃度の主な利点は、アクション電位の伝播と、それゆえ、通常の、パターン化されたシナプス伝達の維持管理を容易にするためです。 HL Salinesのは、アクション電位を介したシナプス伝達を抑制する。電位依存性カルシウ...

の電気生理学的記録ショウジョウバエ胚

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

ショウジョウバエ胚発生と機能的神経科学の両方の研究のための最高の遺伝的モデルです。伝統的に、これらのフィールドは非常に大部分が独立の歴史と科学的なコミュニティと、互いに分離されています。しかし、これらは通常異なる学問分野間のインターフェイスは、神経回路形成の最終段階、機能化学シナプスの機能的電気信号特性と分化の買収の基礎となる発生プログラムです。このインタフェースは、調査のために非常に重要な領域です。 ショウジョウバエでは、機能開発のこれらのフェーズは、胚発生の最後の3分の1の間（25℃）&lt;8時間の期間中に発生します。この後期発達期間が長くタフな、不浸透性の表皮クチクラの堆積により調査に難治性と考えられた。画期的な進歩は、局所的に後期胚の制御解剖を有効にするためにキューティクルに適用できる水重合外科接着剤のアプリケーションでした。背側縦切開で、胚は実験的な調査に腹神経索と体壁の筋肉組織を露出させる、フラットなレイアウトすることができます。ホールセルパッチクランプ法は、個々に識別可能な神経細胞と体細胞の筋から記録するために使用することができる。これらの記録の構成は、イオン電流とニューロンと筋肉の両方の活動電位伝播の外観と成熟を追跡するために使用されています。これらの電気的性質に影響を与える遺伝的変異体はイオンチャネルとそれに関連するシグナル伝達複合体の分子組成を明らかにするために、そして機能的な分化の分子機構の探索を開始するために特徴づけられている。特定の焦点は、中枢神経系と末梢の両方で、シナプス結合のアセンブリとなっています。グルタミン酸作動性神経筋接合部（NMJ）は、光学イメージングと電気生理学的記録の組み合わせに最もアクセスが可能です。ガラス吸引電極は、電圧クランプ筋肉で行われた興奮性接合の電流（EJC）の録音で、末梢神経を刺激するために使用されます。この録音の設定は、シナプスの機能分化をグラフ化し、シナプス前性グルタミン酸放出特性の外観と成熟を追跡するために使用されています。さらに、シナプス後のプロパティは、グルタミン酸受容体のフィールドの外観と成熟を測定するために、筋肉の表面に直接グルタミン酸のイオン導入や圧力のアプリケーションを介して個別に測定することができる。このように、両方の前とシナプス後要素が胚シナプス形成時に個別にまたは組み合わせて監視することができます。このシステムは、大きく胚性シナプス形成を損なうため、シナプスの接続と機能的なシナプス伝達特性の仕様と差別化を支配する分子メカニズムを明らかに遺伝的変異体を分離し、特徴付けるために使用されています。

電気生理学的記録から<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚は、開発途上筋肉と神経細胞の電気的特性の分析だけでなく、グルタミン酸作動性神経筋接合部と中央のコリン作動性およびGABA作動性シナプスにおける機能的シナプス形成の特性評価を可能にする。

ショウジョウバエ（Drosophila）は、胚発生と機能的神経科学の両方を研究するための主要な遺伝学的モデルです。従来、これらの分野はかなり...

適切に調製したoph胚の体壁から、筋肉および運動ニューロンの電気生理学的記録を得ることができます。筋肉6、7、12、または13はホールセル記録構成で容易に記録でき、ギガオームシールを形成して神経筋接合部から記録することで、強固なミニチュア振幅電流を測定することが可能です。吸引電極を用いてCNS出口付近の運動神経を引き込み、シナプス前刺激を与えながら、シナプス後の筋肉においてホールセル電流を測定することができます。あるいは、ピペットを用いてイオン導入法または圧力噴射法により、記録電極の近傍に興奮性神経伝達物質を投与することも可能です。こんにちは。イリノイ大学シカゴ校生物科学部のDaveの研究室のTonです。今日は、前脊髄期の胚性神経筋接合部および中枢ニューロンの電気生理学的記録について解説します。これらの手順は、joof神経筋系の機能と発達を研究するために使用しています。これらの手法はもともとKendall Brodyによって開発され、David Fit Stoneを経て私へと伝えられました。本日は、それを皆さんに伝授します。この手順では、あらかじめ胚を適切に採取し、解剖しておく必要があります。その方法については、Brody FeatherstoneおよびChenによる付随する出版物の「Electrophysiological Recordings from Jossa embryonic muscles and neurons」をご参照ください。記録には標準的なホールセルパッチクランプ法を用います。まず、解剖した胚を小型のプレキシガラス製記録チャンバーに入れます。生理学的記録エリアはファラデーケージによって電気的に遮蔽され、振動減衰テーブル上に設置されています。チャンバーは、KY光学系と40 xの長作動距離水浸対物レンズを備えた正立複合顕微鏡を用い、透過光下で観察されます。温度が上昇するとoph筋のパッチクランプが困難になるため、記録は通常、室温以下で行われます。記録電極の最終抵抗値は5～10 MΩとし、内径が約1 µmになるまで加熱研磨してください。記録電極の先端には、塩化カリウムとスクロースを含む生理食塩液を満たします。標準生理食塩水を含むバスに塩化銀接地線を配置し、この生理食塩水は胚の解剖にも使用します。信号はパッチクランプアンプを用いて増幅され、フィルタリングされた後、後刻の解析のためにデジタル保存されます。Axon社の機器およびソフトウェアなど、パッチクランプ実験に適したあらゆるシステムが使用可能です。胚性神経系の3つの異なる組織から採取した細胞（NMJの筋細胞、ニューロン、および中心運動ニューロン）を、刺激および記録することが可能になります。この胚の調製法を用いれば、ほとんどの実験において任意の胚性筋肉から記録を行うことができます。4つの縦走腹側

electrophysiological-recording-in-the-drosophila-embryo

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、標準のセル全体の技術を使用して単一ニューロンから記録するための準備のために成人のショウジョウバエから全脳を単離するための手順を示しています。それは、記録中に表示したGFP標識された細胞と神経細胞のイメージが含まれます。...

アダルトショウジョウバエの脳から全細胞レコーディング

ここでは、ショウジョウバエの幼虫の神経筋接合部でシナプス伝達を測定するための電気生理学的方法を説明します。誘発放出は、運動ニューロンの軸索を刺激することによって人工的に開始され、NMJの透過は、筋肉に誘発シナプス後応答によって測定することができる。...

ショウジョウバエの幼虫のNMJからシナプス電位を記録するための電気生理学的方法

この手法は、免疫組織化学または電気生理学的記録のためのショウジョウバエ胚の神経筋肉組織を公開します。それは神経筋発達の初期段階でイベントを勉強したり、孵化することができない変異体では電気生理学を実行する際に役立つ。...

収穫と準備ショウジョウバエ</em電気生理学的記録とその他の手続のための>胚

我々はの幼虫に心機能を監視するためにさまざまな方法を提示...

幼虫のモニタリングの心機能キイロショウジョウバエ生理学的研究のための

ジャイアントファイバシステムでは、成人の単純な神経回路です。...

の巨大線維経路からの電気生理学的記録 D.キイロ</em

このビデオでは、動けなくなったショウジョウバエの眼の光受容体活動の電気生理学的記録のプロトコルを概説し、光刺激に応答した電圧変化の正確な測定を可能にします。...

光刺激に対するショウジョウバエ網膜光受容体の電圧応答の電気生理学的記録

このビデオは、ショウジョウバエの幼虫の中枢神経系(CNS)からのニューロン活動の細胞外記録を示しています。切除されたCNSは記録チャンバー内に配置され、下行神経からの電気的活動が記録されてベースラインの発火頻度が確立されます。次に、試験剤を導入し、発火頻度の変化を記録して、薬剤の興奮性または抑制性の効果を決定します。...

ショウジョウバエの中枢神経系における電気的活動の細胞外記録

このプロトコルは、 ショウジョウバエにおいてlabellar味覚ニューロンによって発射活動電位応答の細胞外記録を記述する。...

から電気生理学的記録<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt; Labellar味感覚器

Sharp微小電極は、生きたショウジョウバエの光受容体および視覚介在ニューロン出力の正確な電気生理学的特性評価を可能にします。ここでは、この方法を使用して、制御された光刺激に対する個々の細胞の高品質な電圧応答を記録する方法を示します。この手法は、昆虫の複眼における神経情報処理の研究に最適です。...

の記録細胞内の電圧応答のための電気生理学的手法<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;光刺激に感光体と介在ニューロン<em&gt;インビボ</em

ショウジョウバエmelanogaster光受容体からの全細胞記録は、様々な条件下での自然発生的な暗いバンプ、量子隆起、光に対する肉眼的応答、および電流 - 電圧関係の測定を可能にする。 D. melanogaster遺伝子操作ツールと組み合わせて、この方法は、遍在するイノシトール - 脂質シグナル伝達経路およびその標的であるTRPチャネルの研究を可能にする。...

全細胞電圧クランプ記録のための電気生理学的方法<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;感光体

このプロトコルは、コスト効率的かつ便利な神経蛋白質の遺伝の突然変異の薬理学的エージェントのテストを有効にするショウジョウバエ中枢神経系の降下の電気的活動を記録する方法をについて説明しますや未踏の生理学的経路の役割。...

第三令キイロショウジョウバエの中枢神経活動の電気生理学的記録

学ぶショウジョウバエ胚の電気生理学的記録法。全細胞パッチクランプと吸引電極を用いて、神経筋接合部と中枢シナプスの発達を解析し、シナプス伝達の機能的理解を深める。

の電気生理学的記録ショウジョウバエ胚

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