Name: マウス神経幹細胞の前駆体の文化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: 学ぶマウス神経幹細胞前駆体の分離培養法。ラミニンコーティング、大脳皮質組織の解剖、酵素処理による解離、そして細胞培養の手順を詳細に解説。発生神経科学と細胞生物学研究に有用です。

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<ol><li>マウス神経前駆細胞（NPCは）E12.5胚の皮質から単離した。 </li><li>皮膚と間葉層は解剖終脳胞から削除されました。 </li><li>小胞は、37℃20分間HBSSで0.02％EDTAおよび0.2％BSAを0.05％トリプシン℃でインキュベートした。 </li><li>トリプシン処理をHBSSで1 mg / mlの大豆トリプシンインヒビター（Sigma社＃T6522）の等量を停止させた。 </li><li>組織は、ファイアーポリッシュパスツールピペットで粉砕のいくつかのラウンドを使用して、解離したダイジェスト。 </li><li>細胞をHBSSに0.2％BSAで一回洗浄し、20 ng / mlのEGF、10 ng / mlのFGF2（R＆Dシステムズまたはペプロテック）、2 ug / mlとのヘパリン（とメディアでラミニンでコーティングされたカバースリップ上に50,000細胞/ mlで播種し、シグマ）。 </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

CNSの開発と幹細胞生物学の理解に大きな進歩は、胚性神経幹細胞を、採取分離、培養する当社の能力によって可能になされている。このビデオでは、E12.5マウス大脳皮質および胚性神経幹細胞のその後の凝集および培養の解剖を示しています。他の多くの他の同様のメソッドが正常に他の研究者によって採用されている。

<table><tbody><tr><td>ストレートアイリスCissors</td><td>器具</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>中型鋏</td><td>器具</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鋏</td><td>器具</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>曲鑷子</td><td>器具</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス神経幹細胞の前駆体の文化

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

主要な神経幹細胞の培養は、中枢神経系の発達の基礎となるメカニズムを考察する上で役立ちます。幹細胞研究は、神経系の我々の理解を増加し、私たちは現在不治の脳の病気やけがの治療法を開発できる可能性があります。さらに、幹細胞は神経分化と分化転換と特定の細胞型への細胞の特殊化を指示する遺伝的要因と環境シグナルのメカニズムの詳細な研究を目的とした幹細胞研究のために使用する必要があります。このビデオでは、胎生12.5マウスの背側前脳から細胞を分解するために使用される技法を示しています。解剖の手順は、子宮からE12.5マウス胚を収穫細かい解剖鉗子で&quot;スキン&quot;を除去し、最終的に大脳皮質の部分を分離することが含まれています。解剖の後、組織は、消化し、機械的に解離される。再懸濁し、解離細胞は、その後、神経幹細胞の増殖を支持する&quot;幹細胞&quot;培地中で培養されています。

このビデオでは、マウス胎児の開発皮質からneuroprecursorsの単離に使用方法を説明します。皮質組織を解剖、子宮から胚を取り外す手順、および分離された大脳皮質を消化することが示されている。

一次神経幹細胞培養は、中枢神経系の発達の根底にあるメカニズムを研究する上で有用である。幹細胞研究は増加し...

これが神経前駆細胞の単離、分散、および培養の最初のステップです。まず、24ウェルプレートをコーティングします。このプレートは組織培養用処理がされていないものです。細胞を接着させるために、ラミニンでコーティングします。まず、水とポリリジン（poly-D-lysine）の混合液でコーティングを行います。1ウェルあたり約450 µL添加します。それでは、プレートの半分、こちらの2列をpoly D lysine溶液でコーティングしました。このままフード内で室温で5分間インキュベートします。さて、5分間のインキュベーションが完了しました。ここではバキュームを用いてPDL溶液を除去します。家庭用バキュームを使用します。次に、ウェルを再び水（約450 µL）で洗浄します。水洗いのためのインキュベーション時間は特にありません。そのまま水を吸引します。次に、ラミネート溶液を加えます。ラミネートをEM EM培地に2 µg/mLの濃度で溶解させます。そこで、各ウェルにラミネート溶液を450 µLずつ添加します。現在はプラスチックをコーティングしていますが、これらのウェルにコーティングしたカバーガラスを使用することも可能です。細胞を組織培養インキュベーターにて37 °Cで少なくとも4時間インキュベートします。45度の角度に曲がった微細ピンセット2本と、同様に45度の角度に曲がった微細鋏を用意しています。子宮の初期解剖用に鈍端鉗子を数本、また雌の切断用に大きな鋏を数本用意します。さて、これはCD1系の正常な雌です。胚齢12.5日の胚を妊娠しています。すでにCO2安楽死および頸椎脱臼によって個体を殺処分しました。これから子宮を取り出し、続いて胚を回収します。まず、腹部を70% ethanolで消毒する必要があります。大きな鉗子で、雌の腹部中央から下半分にかけて把持し、一度切開します。器具を置き、そのまま皮膚を裂いて腹部を再度露出し、同じ箇所を把持します。中央でさらにもう一度切開し、外側に向かって切開して雌を開きます。これで胚が露出します。ここに胚で膨らんだ子宮があります。まず、卵巣のすぐ下で最初の切開を行い、脂肪を切り取りながら上方へ引き上げます。その側を下に向け、胚の間だけを掴みます。胚の上部を直接掴むと、組織を損傷させる可能性があります。これは明白なことです。胚はブドウの房のように見えます。再びブドウの間に手を入れ、反対側の 씨방（子房）の上方を切断し、余分な部分を取り除きます。最後はここの中央で切断します。同様に、余分な部分を取り除いています。胚が入った子宮があります。解剖用培地として、PBSに0.6% glucoseおよびpenicillin streptomycinを加えたものを使用します。まず、胚を解剖用培地で洗浄し、血液を除去します。これで解剖はきれいに完了しました。それ

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ここでは、マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）を分離する手法を示す。テクニックは、膨らみを分離し、組織培養にそれをplaceing、ミクロ解剖ウィスカの卵胞を伴います。 4日間 - EPI -...

マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）文化

このビデオプロトコルは、胚14日目マウスの脳の神経節隆起から神経幹細胞の単離と拡大のためのニューロスアッセイのアプリケーションを示しています。...

ニューロスフェアのアッセイを使用してマウス胎児神経幹細胞培養の確立

神経管から胚の神経堤の分離の使用を容易に...

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

このビデオは、成体マウスの脳から側脳室壁を分離し、酵素組織の解離を行って単一細胞を得るための詳細なプロトコルを示しています。次に、これらの細胞を特定の培養条件にさらして、神経幹細胞の増殖を選択的に増強し、オリゴデンドロサイトとアストロサイトの共培養への分化を促進します。...

成体マウス神経幹細胞からのオリゴデンドロサイトとアストロサイトの混合培養物の取得

このビデオでは、マウス胚性幹細胞(mESC)から神経前駆細胞(NPC)をin...

マウス胚性幹細胞から神経前駆細胞を作製する技術

ここでは、脳室下帯と個々の成体マウスの歯状回から、付着性単層またはニューロスフェアのいずれかとして、神経前駆細胞培養を同時に生成するための詳細なプロトコルを記述します。...

マウスを一回、二つの文化：個々のマウスの二つの神経原性のゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

このプロトコルは、無血清単層法を使用して胚性幹細胞から神経前駆細胞を生成する方法を詳細に説明しています。これらの前駆細胞は、成熟した神経細胞タイプの誘導や神経仕様のプロセスの研究に使用でき、化合物スクリーニングのためのマルチウェルフォーマットスケーリングに適しています。...

無血清単層培養中のマウス胚性幹細胞の神経分化

成体神経幹細胞(aNSC)の増殖のための培養システムを確立することで、aNSCの検査と治療への応用が可能になります。脳梁下領域(SCZ)は、最近、成体マウスの新規神経芽細胞形成領域として認識されています。ここでは、SCZ-aNSCの単離、拡張、および分化の方法について説明します。...

マウス梁下ゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

E13マウス胚神経節隆起から顕微鏡下神経幹細胞の分離法を紹介します。...

マウス萌芽期の神経幹細胞の分離と培養

吊り下げドロップ法を用いて、マウス胚性幹細胞を神経細胞に分化する手順について説明する。また、RT-qPCR、免疫蛍光、RNA-seq、フローサイトメトリーを通して包括的なフェノミック解析を行っています。...

マウス胚性幹細胞からの神経前駆細胞とニューロンの分化と特徴付け

学ぶマウス神経幹細胞前駆体の分離培養法。ラミニンコーティング、大脳皮質組織の解剖、酵素処理による解離、そして細胞培養の手順を詳細に解説。発生神経科学と細胞生物学研究に有用です。

マウス神経幹細胞の前駆体の文化

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