Name: 電位感受性色素を用いてモルモット腸ネットワークにおける電気活動の光学的記録 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-04T17:45:00.000+00:00
Duration: 14 min 23 s
Description: 学ぶ電位感受性色素を用いたモルモット腸神経ネットワークの電気活動光学的記録法。高速度カメラで神経活動を可視化し、腸神経系の機能的連結を解析する詳細プロトコルを解説。

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私達は私達が私たちと彼の技術的な専門知識を共有するための2光子ビデオの冒頭に示されている画像、およびH.高野を取得するために彼の2光子顕微鏡を使用できるようにするためのDAコールターを（CHOP）に感謝いたします。

<ol><li>Johnson, L. eonard R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCosta%2C+Marcello+%22in+Physiology+of+the+Gastrointestinal+Tract%2C+edited+by+Leonard+R%22">in Physiology of the Gastrointestinal Tract, edited by Leonard R</a>. , Raven Press. New York. 1-1 (1987).</li>
<li>Obaid, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+patterns+of+activity+in+an+intact+mammalian+network+with+single-cell+resolution%3A+optical+studies+of+nicotinic+activity+in+an+enteric+plexus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal patterns of activity in an intact mammalian network with single-cell resolution: optical studies of nicotinic activity in an enteric plexus.</a> J Neurosci. 19 (8), 3073-3073 (1999).</li>
<li>Obaid, A. L., Loew, L. M., Wuskell, J. P., Salzberg, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+naphthylstyryl-pyridinium+potentiometric+dyes+offer+advantages+for+neural+network+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Novel naphthylstyryl-pyridinium potentiometric dyes offer advantages for neural network analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 134 (2), 179-179 (2004).</li>
<li>Hirst, G. D., McKirdy, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+potentials+recorded+from+neurones+of+the+submucous+plexus+of+guinea-pig+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Synaptic potentials recorded from neurones of the submucous plexus of guinea-pig small intestine.</a> J Physiol (Lond). 249 (2), 369-369 (1975).</li>
<li>Salzberg, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Methods+in+Cellular+Neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Current Methods in Cellular Neurobiology.</a> Barker, J., McKelvy, J. , John Wiley and Sons, Inc. New York. 139-139 (1983).</li>
<li>Salzberg, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ultra-stable+non-coherent+light+source+for+optical+measurements+in+neuroscience+and+cell+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">An ultra-stable non-coherent light source for optical measurements in neuroscience and cell physiology.</a> Journal of Neuroscience Methods. 141, 165-16 (2005).</li>
<li>Obaid, A. L., Nelson, M. E., Lindstrom, J., Salzberg, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+studies+of+nicotinic+acetylcholine+receptor+subtypes+in+the+guinea-pig+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Optical studies of nicotinic acetylcholine receptor subtypes in the guinea-pig enteric nervous system.</a> J Exp Biol. 208 (Pt 15), 2981-2981 (2005).</li>
<li>Obaid, A. L., Zou, D. J., Rohr, S., Salzberg, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+recording+with+single+cell+resolution+from+a+simple+mammalian+nervous+system%3A+Electrical+activity+in+ganglia+from+the+submucous+plexus+of+the+guinea-pig+ileum%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Optical recording with single cell resolution from a simple mammalian nervous system: Electrical activity in ganglia from the submucous plexus of the guinea-pig ileum.</a> Biol. Bull. 183, 344-344 (1992).</li>
<li>Salzberg, B. M., Davila, H. V., Cohen, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+recording+of+impulses+in+individual+neurones+of+an+invertebrate+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Optical recording of impulses in individual neurones of an invertebrate central nervous system.</a> Nature. 246 (5434), 508-508 (1973).</li>
</ol>

このプロトコルは、二つの目標を念頭に書かれています。最初のものは、過去10年間の多くの技術的進歩、電位感受性色素を用いて電気的活性の光記録のおかげで無傷の神経ネットワークを研究するための最も強力な、信頼性と手頃な方法論の一つとなっている、という他の研究者を説得することです。確かに、それは簡単に控えめなリソースを持つ実験室でも実装することができます。第二の目標は2つの神経叢とその生物学的な出力の電気的挙動と分子や細胞のイベントを相関するためのユニークな実験モデルとして、腸神経系を促進することである。

<table><tbody><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3769</td><td>Earle&amp;rsquo;s salts含有、L-グルタミン、フェノールレッド、重曹不含</td></tr><tr><td>Sylgard</td><td>Dow Corning</td><td>184 シリコーンエラストマーキット</td><td></td></tr><tr><td>解剖用昆虫ピン</td><td>F.S.T.</td><td>26001-30</td><td></td></tr><tr><td>Dumontピンセット</td><td>F.S.T.</td><td>11203-23 または 11200-33</td><td></td></tr><tr><td>Moria MC19/B Pascheff-Wolff スプリングシザー</td><td>F.S.T.</td><td>15371-92</td><td></td></tr><tr><td>実験中の組織固定用ピン</td><td>セイリン製作所</td><td>Seirin Spinex</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0773</td><td></td></tr><tr><td>プロテアーゼ IX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6141</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Invitrogen</td><td>10439-016</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン 100X</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>ニフェジピン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Di-4-ANEPPDHQ</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>D36802</td><td></td></tr><tr><td>4チャンネル刺激発生装置</td><td>Multi Channel System MCS GmbH</td><td>2000 シリーズ</td><td></td></tr><tr><td>ペリスタルティックポンプ</td><td>Rainin</td><td>2チャンネル Dinamax RP-1</td><td></td></tr><tr><td>高速カメラ</td><td>RedShirtImaging, LLC</td><td>NeuroCCD-SM</td><td></td></tr><tr><td>1:10 縮小投影レンズ / リレーレンズ</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>正立顕微鏡</td><td>オリンパス株式会社</td><td>BX61TRF</td><td></td></tr><tr><td>電動X-Yトランスレーター付きGibraltar固定ステージ</td><td>Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada</td><td>PSSG--BX2</td><td></td></tr><tr><td>リニアマトリクス電極</td><td>FHC, Inc.</td><td>カスタムメイド</td><td></td></tr><tr><td>アクティブ防振台</td><td>Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA</td><td>Micro 60</td><td></td></tr><tr><td>超低リップルフィードバック安定化電源</td><td>Kepco, Flushing, NY</td><td>ATE 75-15M</td><td></td></tr><tr><td>熱線吸収フィルター</td><td>Schott AG</td><td>KG-1</td><td></td></tr><tr><td>高Q干渉フィルター</td><td>Chroma Inc.</td><td>HQ530/50</td><td></td></tr><tr><td>ダイクロイックミラー</td><td>Chroma Inc.</td><td>565 nm (透過率 50%)</td><td></td></tr><tr><td>ロングパスフィルター</td><td>Chroma Inc.</td><td>HQ572LP</td><td></td></tr><tr><td>遮音カーテン</td><td>Acoustical Surfaces, Inc.</td><td>BSC-25</td><td></td></tr><tr><td>Neuroplex</td><td>RedShirtImaging, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IDL</td><td>ITT Visual Information Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>専用カメラコントローラー付き高解像度CCDカメラ</td><td>浜松ホトニクス株式会社</td><td></td><td></td></tr><tr><td>高解像度カメラ用フレームグラバー</td><td>Data Translation</td><td>DT3120K-1</td><td></td></tr><tr><td>高解像度カメラ用イメージングソフトウェア</td><td>Data Translation</td><td>Global Lab Image/2</td><td></td></tr></tbody></table>

電位感受性色素を用いてモルモット腸ネットワークにおける電気活動の光学的記録

Optical Recording of Electrical Activity in Guinea-pig Enteric Networks using Voltage-sensitive Dyes

腸神経系（ENSは）分離して複雑な動作を行うことのできる識別機能を持つ自己完結型のネットワークです。その神経細胞（直径10〜25μmであるが）腸壁の異なる平面に限定されている神経叢に配置されています<sup&gt; 1</sup&gt;、筋層間神経叢は、縦と円形の筋層、及び円形の筋層と粘膜との間の粘膜下神経叢との間で見つけることができます。これらの神経叢（上皮、内分泌細胞、免疫要素、血管や平滑筋の輸送）のためのエフェクターシステムはまた、腸壁内に含まれているので、半無傷の調製物は、異なる反射経路の個々のコンポーネントを保持することを解剖することができます。エフェクターシステムの動作は、コンサートで行動する粘膜下と筋層間神経叢によって制御されます。したがって、神経節内との間に、と神経叢の間の通信のシナプスの相互作用の詳細な知識は、正常な胃腸機能を理解するために不可欠です。 ENSは、無傷の神経系として、1つは神経回路網とその生理的な出力の電気的挙動を分子や細胞のイベントを関連付けることのできるユニークな実験的なモデルです。ため、その神経叢の準2次元組織から、ENSは、特によく電位感受性色素を採用し、複数のサイト光記録技術を用いたニューラルネットワークの学習に適しています<sup&gt; 2,7,8,9</sup&gt;。我々はここでは比較的新しいnaphthylstyryl - ピリジニウム染料（ジ-4 - ANEPPDHQ）の使用を説明します<sup&gt; 3</sup&gt;非常に低い光毒性、内在化の速度が遅い、と顕著な化学的安定性を含む、その前任者以上の複数の利点を、提供している。サブミリ秒の時間分解能を可能にするカメラと組み合わせて使用​​すると、この色素は、私たちは、100Xの倍率で〜2.5μmの最大限の空間分解能と視野内のすべてのニューロンの電気的活動を監視することができます。低倍率（10倍または20倍）で、単一セルの分解能の犠牲は間神経節回路の複雑さを明らかに、視点の利得によって補償されます。

電位感受性色素は、その単一細胞から複数の神経節の回路への範囲は調整可能な解像度と、そのようなモルモット腸神経系の神経叢としてそのままニューラルネットワークからの電気活動の光学的記録を有効にする方法このプロトコルは示しています。

腸管神経系（ENS）は、独立して複雑な動作を行うことが可能な、特定の機能を備えた自己完結型のネットワークである。そのニューロンは...

このビデオでは、電位感受性色素D-4-ANEPPDHQを用いた、電気刺激による腸管神経系標本の解剖およびその後のイメージングについて説明します。安楽死させたモルモットから腸の一節を採取し、光学的な記録を行うために、まず粘膜下層を、最終的に筋層間神経叢を露出させる解剖を行います。高解像度の初期画像を撮影した後、D-4-ANEPPDHQで染色し、固定した組織に電極を配置します。電気活動を示す光学的な変化を高速度カメラで記録します。高速度撮影中に、電気刺激を印加します。その後、高解像度画像を高速度カメラのピクセルマップに重ね合わせ、neuro plexを用いて解析します。こんにちは。私はブライアン・サルツバーグです。ペンシルベニア大学神経科学科の細胞光学研究室（Laboratory of Cellular Optics）、通称locoのディレクターを務めています。私はアナリア・オビデです。私も細胞光学研究室のメンバーです。本日は、電位感受性色素を用いて、無傷の哺乳類ニューロンネットワークから電気活動を記録する手順をご紹介します。この手法を用いて、腸管神経系（「第二の脳」または「腸の脳」とも呼ばれます）を構成する2つのネットワーク内およびネットワーク間のニューロン接続性を研究します。それでは始めましょう。イソフルランによる吸入麻酔を施し、断頭させた150～200 g（または2～3週齢）のハートリーギニアピグの小腸を摘出し、粘膜下層および腸管神経叢の調製を開始します。次に、温めて酸素飽和させたM199 DM溶液で管腔内を洗浄し、腸内容物を除去します。極性を保持するように注意しながら、8～10 cmの長さで腸管分節を切断します。それを、室温のM1 99 DMを入れたsardコーティング済みの10 centimeterガラスシャーレに移します。シャーレを暗視野照明を備えた解剖顕微鏡に設置します。次に、はさみを用いて腸間膜縁を切開し、昆虫ピンを使用して腸管セグメントの粘膜側を上にして固定します。ピン留め後に組織が長方形になり、粘膜下神経叢の列が規則的に整列するように、均一な張力を維持することが極めて重要です。先端が直線のデュモント精密ピンセットをほぼ水平に保持します。腸管セグメントの一端にある神経叢を掴み、組織の長軸方向に沿って牽引して粘膜を剥離します。粘膜のリボン状の組織を分離し続け、粘膜下神経節と粘膜下血管を含む粘膜下層を露出させます。次に、非常に精密な鋏を用いて、環状筋線維の走行に合わせて粘膜下層を切開します。続いて、環状筋を押し下げながら、精密ピンセットで粘膜下層を非常に慎重に持ち上げます。鋏を層間に挿入し、縦方向に沿って切開します。剥離が進むにつれて、粘膜下層を準備試料の残りの部分から切り離します。次に、最初の切開部位から1.5〜3 cm離れた位置で、輪状筋線維の走行に沿って2回目の切開を行い、粘膜下層試料の最終的なサイズを決定します。得られた粘膜下層セグメントの厚さは30〜50 µmであり、薄い膜のような外観を呈します。これを新鮮なM1 99 DMを含む別のSylgardディッシュに移し、緊張をかけないように慎重にピンで固定します。その後、ディッシュを室温の酸素供給チャンバーに入れ、後で使用できるようにします。この時点で、元の腸管セグメントから粘膜および粘膜下層が除去され、輪状筋が露出しているはずです。このセグメントを用いて、筋層間神経叢を露出させるための筋層間神経叢標本を作成します。ストレートチップの微細ピンセットを用いて、標本の両側から繊維束を引き剥がし、輪状筋層を可能な限り除去します。露出した筋腸管神経叢は、縦走筋層およびその下の内環状筋（CI）から分離することはできません。筋腸管神経叢の標本を、酸素供給されたM1 99 Mを含む新しいサルガードコートディッシュに移します。次に、生存筋を含むサンプルを軽くピンで固定します。光学実験の数分前に、標本をnefe 2 µMを含むM1 99 DMが満たされた、より小さい新しいサルガードコートディッシュに移して筋収縮を防止し、周囲に非常に細いピンを複数配置して慎重にしっかりと固定します。張力が均等に分散され、組織がシルガード製の底面に完全に平らに密着していることを確認します。これで、組織標本の生理学実験に向けた準備が完了しました。ガラスバイアルを用いて、2 µM nifedipineを含むM1 99 M溶液にDAI 4-ANEPP-HQを5〜50 µg/mLの濃度で溶解させた定常溶液を調製し、アルミホイルで遮光します。ストックソリューション由来のエタノール濃度が、ニフェジピンを含むM1 99 DM溶液に対して0.5%未満になるようにし、標本を覆っていた溶液を調製済みの染色液に置き換えます。組織を完全に覆うのに十分な量のラダーを用いて、室温で10〜30分間インキュベートします。インキュベーション後、チャンバーの内容物をすべて入れ替えることで、酸素飽和M1 99 M plus NEFEを用いて標本を洗浄します。電気刺激を与えた標本における神経活動の光学的な記録は、イメージスプリッターを備えた正立エピ蛍光顕微鏡、低解像度精密高速カメラ、高解像度白黒カメラ、コンピュータ制御の刺激発生装置、およびマイクロマニピュレーターで構成されるシステムを用いて行われます。装置全体はアクティブ防振テーブル上に設置され、空気伝播振動を最小限に抑えるために、厚手の遮音カーテンとマイラー製のルーフで囲われています。2台のカメラからの画像取得は、neuro plexとGlobal Lab image two、またはその他の画像取得ソフトウェアを動作させる1台のコンピュータで実行可能ですが、本構成では、光学実験を開始するために、それぞれ別のカメラを制御する2台のコンピュータを使用しています。染色済みのパンニング試料を入れたチャンバーを顕微鏡ステージに設置します。D four A および EPPD HQ は、脂質環境下でのみ蛍光を発する膜不透過性染料であるため、染色した腸管調製物中の健全なニューロンを 20x 以上の倍率で観察すると、空の風船のような外観を呈します。励起には HQ 5 35 50 フィルター、蛍光には HQ 5 72 LP フィルター、および 5 65 nanometer ダイクロイックミラーを使用します。次に、マイクロマニピュレーターを用いて、組織の口側端にマルチバレル線形マトリックスアレイ電極を配置します。その際、電極が顕微鏡対物レンズに接触しないように注意してください。1 cmの範囲に10本のタングステン電極が配置された線形マトリックスアレイは、複数の独立した神経経路を刺激することができ、相互に接続された神経節回路の研究に適しています。ただし、代表的なデータについては、自作の2リード刺激電極を使用しました。機能的な記録を行う前に、タッキーワックスを用いてチャンバーの反対端に接地電極を配置し、電気活動を記録する領域の高解像度白黒画像を取得して視覚化を容易にします。蛍光部分が暗く表示されるように、グレースケールを反転させても構いません。コンピュータ制御の刺激発生装置を用いて電流刺激を適用するには、まず適切な強度、持続時間、周波数、刺激回数、および光学データ取得開始からの遅延時間を設定して、装置をプログラミングします。刺激が光学データ取得の範囲内で行われるように、刺激発生器をneuro plex制御デバイスとして設定します。次に、フレームレート、フレーム数、およびカメラゲインを指定して、neuro plex内で取得パラメータを設定します。活動電位を完全に定義するには、フレームレートを最低1 kHzに設定する必要があります。D-four-AおよびE-P-P-G-H-Qは、脱分極に伴い蛍光が減少しており、その減少は電圧変化に線形に相関するため、Neuroplex内で光学信号の表示を反転させ、活動電位が上下逆さまに表示されないようにします。データ収集を開始してください。各機能的記録を行う前に、各視野の高解像度白黒画像を新たに取得することを忘れないでください。データ取得が完了したら、NeuroPlexを使用してオフラインで結果を解析します。画面上の「page display」と呼ばれる領域に、80×80高速カメラでキャプチャされたプレパレーションの粗い画像が個別のフレームとして表示されます。ページモードを「absolute frame」に設定すると、NeuroPlexのディスプレイコマンドを用いて、2台目のカメラで取得した高解像度画像が粗い画像のピクセルマップ上に重ね合わせて表示されます。これには、ページモードを「absolute trace」から「traces」に変更し、ディスプレイコマンド内から重ね合わせ画像を選択する必要があります。マウスを使用して、ページディスプレイに表示された画像から個々のピクセルまたはピクセルのグループを選択します。これらの関心領域（ROI）の出力がトレースディスプレイウィンドウ内にトレースとして表示され、それらのピクセルによって記録された光学的な変化の大きさが時間の関数として明らかになります。高解像度画像のグレースケールを反転させることで、トレースモードのページ表示における視認性が向上します。また、スティミュレーターからのアナログ出力を表示することを強く推奨します。トレース表示ウィンドウに含めるアナログ出力チャンネルを選択してください。この出力は、実験中に適用された刺激の正確なタイミングを示します。データをムービーとして閲覧するには、neuro plex内のムービーコマンドを使用して、蛍光強度の最大および最小の変化に合わせて調整された擬似カラースケールを用いて、データセット内の連続するフレームを表示します。DIA four A-N-E-P-P-D-H-Qで染色した筋層間神経叢標本の神経節を、高解像度カメラと60x対物レンズで撮影しました。データ収集の間、標本に40 Hzで5回のパルス列による刺激を与えました。各パルスの振幅を15 milliamps、持続時間を0.5 millisecondsとして、4つの関心領域（ROI）を特定し、選択した領域で平均化した光学データを表示するためのトレースを作成しました。擬似カラーフレームシーケンスにおいて、神経活動を示す膜脱分極の最初の光学応答領域は、黄色から赤色として現れます。これらのデータは、刺激によって誘発された活動が各神経節の離散的な領域で発生しており、その大部分が通過軸索によるものであることを示しています。ROI 2、3、および4は、ROI 1からさまざまな距離にある個々のニューロンを特定しています。図2は、情報の伝播経路を10倍の倍率で示したものです。矢印は、特定された筋層間神経節を活性化させる刺激の進行方向を示しています。ここでは、電圧感受性色素を用いて電気活動を記録するための光学系の構成要素と、この技術を腸管神経系に適用することで、顕微鏡下で無傷の哺乳類ネットワーク内およびネットワーク間の機能的コネクティビティを研究できる可能性について説明しました。光学記録技術を使用する際は、細部への細心の注意が極めて重要です。光学的なノイズ、機械的なノイズ、および電気的なノイズの発生源を慎重に制御し、プレパレーションの状態を細心の注意を払って維持する必要があります。したがって、光学記録を成功させるには、本プロトコルの個々のすべてのステップを習熟することが不可欠です。以上となります。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

optical-recording-electrical-activity-guinea-pig-enteric-networks

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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電位感受性色素を持つカニ口と胃の神経節における神経細胞の光学的イメージング

蛍光色素ラベル解剖投影に基づくニューロンの亜集団の逆行性輸送。標識された軸索は、視覚的に対象とすることができます...

逆行性蛍光標識は、特定された神経細胞から標的細胞外シングルユニット記録を可能にします<em生体内で&gt;</em

サブミクロンの空間とサブミリ秒の時間分解能で膜電位の変化を監視するためのイメージング技術が記載されている。電位感受性色素のレーザー励起に基づく手法では、軸索と軸索側枝、樹枝状の端子、および個々の樹状突起棘における信号の測定が可能です。...

軸索、樹状突起および脳スライスにおける個々のニューロンの樹状突起棘から電位感受性色素記録

このビデオは、電位感受性色素で染色された脳スライスのニューロン活動の変化を観察する手順を示しています。この色素は、ニューロンの蛍光強度を変化させることにより、ニューロンの膜電位の変化を反映しています。このプロセスでは、電気刺激と高度なイメージング技術を応用することで、VSD蛍光に基づく神経膜電位のリアルタイムな変化を視覚的に追跡することができます。...

電位感受性色素で染色された脳切片における神経活動の光学的記録

このビデオは、ex-vivoラット結腸の結腸求心性神経の活動を記録する方法を示しています。このビデオは、両端にカニューレを挿入し、生理食塩水を注入して管腔内圧を上昇させる方法を示しています。圧力が上昇すると、神経信号が上昇し、その刺激を示します。...

Ex Vivoラット結腸における結腸求心性神経からの電気生理学的記録

腸内神経系(ENS)は、腸壁に位置するニューロンとグリアのネットワークで、腸の反射を制御します。このプロトコルは、Ca2+イメージングを使用してENSのライブ調製物中の腸管ニューロンおよびグリアの活動を記録する方法を説明しています。...

腸神経系のその場のCa 2+イメージングに

電圧感受性染料を用いた脳スライスの再現性と安定した光学記録法をご紹介します。この記事では、従来の海馬スライス製剤を用いた光信号の電圧感受性染料染色と記録について説明する。...

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このプロトコルでは、マルチファイバーフォトメトリー記録の実装と実行方法、カルシウムに依存しないアーティファクトの修正方法、およびデュアルカラーフォトメトリイメージングに関する重要な考慮事項について詳しく説明します。...

自由に動く動物の神経活動を記録するマルチファイバー光メトリー

このプロトコルは、吸光度の電圧依存性色素とフォトダイオードアレイを用いた非トランスジェニック無脊椎動物種における単細胞分解能を用いたニューロン集団活性をイメージングする方法を提示する。このアプローチにより、迅速なワークフローが可能になり、イメージングと解析を1日にわたって追求できます。...

非トランスジェニック無脊椎動物における単一ニューロン分解能を用いたネットワークダイナミクスを記録するためのフォトダイオードベースの光学イメージング

ここでは、ミニブタモデルにおける軟硬膜下電極アレイの長期的な性能と安全性を評価する方法を提示し、手術方法とツール、術後の磁気共鳴画像法、聴覚皮質の電気生理学、インプラントの電気化学的特性、および死後の免疫化学について説明します。...

ミニブタにおける硬膜下軟性皮質電図(ECoG)アレイ移植と長期皮質記録

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電位感受性色素を用いてモルモット腸ネットワークにおける電気活動の光学的記録

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