Name: 内リンパ管の閉塞による内リンパ水腫の外科的誘導 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-22T16:52:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: 学ぶ モルモットの内リンパ管外科閉塞による内リンパ水腫誘導法。メニエール病の耳疾患モデルとして、蝸牛の組織学的変化と進行性難聴を評価する技術を解説します。

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この作品は、アメリカ耳鼻科学会からCAMへの助成金によって、大学病院事件医療センターからKNAとCAMへの助成金によって部分的にサポートされていました。我々は、顕微鏡カメラで私たちを提供するためのフォーカスメディカルグループ株式会社（ヒンクリー、オハイオ州）でジェフChurneyに感謝したいと思います。ビデオ制作サービスは、我々は、ビデオの準備中に彼らのコメントのためにCWRUでジョナサンフランケルとアレックスレヴィットに感謝融合クリエイティブマーケティング株式会社（ヴァルドスタ、ジョージア州）の好意により提供。

パート1：麻酔と手術の準備<ol><li>成人では、チャールズリバーインターナショナルラボラトリーズ社（ウィルミントン、MA）からメスダンカン- Hartley系モルモットにケタミンを60 mg / kgおよびキシラジン12 mg / kgの筋肉内で麻酔です。 </li><li>石油の潤滑剤は、乾燥による角膜損傷から動物を保護するために目に適用されます。 </li><li>動物は、肩に頭の上からと耳の間に剃毛されています。 </li><li>剃毛面積を7.5％のエチルアルコール70％続いてポビドンヨードを持つ最初の滅菌方法で整形処理されています。 </li><li>動物は、加温ブランケットと手術台の上に、頭と曲がる首を上昇プラットフォーム上に配置されます。動物の頭部は、外科医から指示される。首の十分な屈曲が十分に後頭隆起を公開するために必要です。 </li><li>動物は無菌的に掛けている。 </li></ol>パート2：骨の後頭部の切開と露出<ol><li>ブピバカインに加えてエピネフリン（Marcaine）0.25％は将来の切開部位（後頭部に沿って正中背部皮膚の切開）に沿って適用されます。これは、出血を制限する、ローカルの血管収縮を引き起こし、動物が目覚めの後に持続的な術後鎮痛を提供します。 </li><li>正中背部皮膚の切開は、後頭部に沿って頭皮に行われます。 <img src="/files/ftp_upload/1728/1728fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1：上記のような皮膚の切開は、背側正中線に沿って行われます。 </li><li>適切な露出を得るために、皮膚は切開の両側に小さな曲線の止血剤を置くことによって横方向に収納されています。 </li><li>水平方向の切開は、骨の後頭部を公開するために首の筋肉に沿って行われます。この段階では動物が大後頭神経の切除のために適切な麻酔にもかかわらず、ピクッと動くことができる。脊髄切除は後頭下部に水平切開と危険です。この合併症は、下層の骨が常に手術用メスの刃の下に感じられるようにすることで回避することができます。 </li><li>骨に切開後頭下筋群と、第三止血剤は、優れた筋肉の端を撤回するために使用されます。この止血剤は、外科の助手によって固定されています。 </li><li> Lempert骨膜起子は、側頭後頭縫合糸を公開するために使用されます。 </li></ol>パート3：側頭後頭縫合を掘削<ol><li>頭頂後頭縫合（図2）、1.5ミリメートルダイヤモンドバリでotologicドリルの露光時に縫合するinferio -横方向にドリルダウンするために使用されます。 </li><li>頭蓋骨の外側のテーブルの下に、板間層（頭蓋骨のテーブルの間に介在する海綿骨）の海綿状のテクスチャが見えるようになります。板間層が離れて掘削されると、頭蓋骨の内側の表は、S状静脈洞である淡い青色の色調を持つと共に、表示されます。 </li><li> S状静脈洞のマージンは、容器を貫通することなく定義されています。 </li><li> S状静脈洞を覆う骨が十分に薄くされると、より高い倍率が利用されるとストレートピックは慎重にS状静脈洞を覆う骨を除去するために使用されます。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1728/1728fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2は、部分的に掘削される領域は、側頭後頭縫合糸を覆う。 第4部：管閉塞<ol><li>スケルトンS状静脈洞は、蓋を明らかにするために内側に引っ込められる。 </li><li> 0.5ミリメートルダイヤモンドバリは、蓋の内側と内リンパ嚢とダクトへのドリルダウンするために使用されます。 </li><li>内リンパ管は、まっすぐなピックを使用して骨ワックスが詰まっています。 </li><li>頭蓋骨の欠損は、Gelfoam（ファイザー社、ニューヨーク、NY）で補強されています。 </li><li> 4から0 POLYSORB（米国外科、ノーウォーク、コネチカット州）縫合糸は、筋肉を結集するために使用されます。皮膚切開を閉じるための皮下縫合の技術へのシームレスな移行は、そこです。この閉鎖で、その後縫合糸を除去する必要はないと動物は、サイトでの爪と縫合糸を抜くなるおそれがないものであること。 </li></ol>第5部：術後ケアモルモットは、体温を維持するためにインキュベーターに入れて、目を覚ましと胸骨の位置を維持することが可能になるまで30分間隔でチェックされます。動物は、呼吸速度とボディの色のために検査されます。このセンターは、それぞれ、術後感染の予防と痛みのコントロールのためにエンロフロキサシン（皮下22.7 mg / mLに、0.2 mL）およびブプレノルフィン（皮下0.3mg/mL 0.05 mLを、）を使用します。鎮痛は術後一日1と2で一度手術の日に二回与えられます。抗生物質は、無菌のsuのために必要なものではありませんが、rgery、予防的抗生物質5日間、1日2回のコースでは、術後3日目givenonce可能性があります。 合併症と管理<ol><li>呼吸抑制は、外科医は、常に動物の呼吸に注意する必要があります。呼吸が減速または停止した場合、手術を中止し、視覚的に胸部の動きを点検。動物が呼吸困難を経験したり、苦しい呼吸している場合、口と気道が閉塞されていないことを確認してください。 </li><li>出血が停止するまでS状静脈洞への浸透は、吸引チップと一緒にGelfoamと圧縮を使用してください。 </li><li>硬膜浸透は、Gelfoamの欠陥をカバー。 </li><li>前庭障害は、S状静脈洞への横方向の1mm以上のドリルでください。モルモットのすべてのデータが無効になる後半規管を、傷つけるようなリスクをして。 </li></ol>

<ol><li>Andrews, J. C., Bohmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surgical+approach+to+the+endolymphatic+sac+and+the+cochlear+aqueduct+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">The surgical approach to the endolymphatic sac and the cochlear aqueduct in the guinea pig.</a> Am J Otolaryngol. 10, 61-66 (1989).</li>
<li>Kimura, R., Schuknecht, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membranous+hydrops+in+the+inner+ear+of+the+guinea+pig+after+obliteration+of+the+endolymphatic+sac%5BTitle%5D)+AND+%22Pract+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Membranous hydrops in the inner ear of the guinea pig after obliteration of the endolymphatic sac.</a> Pract Otolaryngol. , (1965).</li>
</ol>

動物実験は、ケースウェスタンリザーブ大学の動物実験使用の委員会が定めるガイドラインおよび規則に従って行った。

内リンパ管の外科的閉塞後の数週間では、動物対象は聴覚誘発脳幹反応によって測定されるように変動する感音難聴を経験する。聴性脳幹反応（ABR）の記録のサンプルを図3に示します。左耳は逃れたコントロールとして機能します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1728/1728fig4.jpg"><img border="0" src="/files/ftp_upload/1728/1728fig3tmb.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"></a> 図3：モルモット28週間後の手術から16 kHzでのABRのしきい値レベル。左側（運転されていない）の耳のためのしきい値は30 dB SPLであり、右（駆動）の耳を70 dBに近いです。 蝸牛の組織学的検査もライスナーの膜（図4）の膨張を示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_up...

内リンパ管の閉塞による内リンパ水腫の外科的誘導

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

内リンパ管の閉塞や閉塞によるモルモットの内リンパ水腫の外科的誘導（ELH）が条件と人間のメニエール病のために相互に関連付けることが重要、よく受け入れられた動物モデルである。 1965年に、ロバート木村とハロルドSchuknechtは、最初の内リンパ管の閉塞（木村1965）のための硬膜内のアプローチを説明した。有効であるが、脳の保護カバーの浸透を必要とするこの手法は、、動物の被験者における罹患率と死亡率の望ましくないレベルを計上した。その結果、アンドリュースとベーマーは予想中枢神経系（CNS）浸透。（アンドリュースとベーマー1989）に関連する合併症の少ないを生成する硬膜外アプローチを開発し、 硬膜外アプローチは、ここで説明した最初の基本的な筋層を露出させる後頭部の地域における正中切開を必要とします。我々は右側のみで動作します。上を覆う組織の適切な収縮した後、水平方向の切開は、右頭頂後頭縫合線を公開する権利後頭部の筋肉に行われます。 S状静脈洞が見えるようになるまで、骨はすぐにinferio横ずれ縫合線（図1）その後otologicドリルで掘削された。 S状静脈洞の内側陥凹は、内リンパ嚢を収容する内リンパ管の蓋を明らかにする。内リンパ嚢の領域に蓋の内側の掘削は、閉塞し、最終的にELHを生成するために骨蝋を充填した内リンパ管を、明らかに。 次の週では、動物はプログレッシブ、変動する難聴とELHの組織学的証拠を紹介します。

このビデオでは、外科的内リンパ水腫を生成するためにモルモットの内リンパ管を妨害する方法を示しています。

内リンパ管の閉塞および遮断によるモルモットへの内リンパ水腫（ELH）の外科的誘発は、広く認められている動物...

こんにちは、クリス・エデンです。私はケース・ウェスタン・リザーブ大学の耳鼻咽喉科・頭頸部外科で研究員を務めています。本日は、モルモットにおける内リンパ管の外科的閉塞について説明します。この処置は内リンパ水腫を誘発し、多くの疾患に関連する耳の病理モデルとして用いられています。リンパ水腫（Lymphatic hydros）は、蝸牛の内リンパ腔の腫脹であり、Meniere病の重要な組織学的指標となります。ここでは、2つの外リンパ腔（前庭水管と鼓室水管）と、内リンパ管と連続し拡張していない蝸牛管（scala media）を持つ、正常な蝸牛の断面図を示します。この内リンパ管が、我々が操作を行う構造です。手術後数週間以内に、ここで示されているように蝸牛管が拡張し、ライスナー膜（Reissner's membrane）が伸展します。また、動物の手術側耳では、進行性の変動性聴力低下が起こります。多くの内耳疾患と同様に、モルモットにおける内リンパ水腫の外科的誘発は、1965年にRobert KorとHarold Schneckによって初めて報告されて以来、ヒトのメニエール病におけるゴールドスタンダードな動物モデルとなってきました。この処置は当初、より侵襲的な硬膜内アプローチで行われていましたが、当センターでは動物の罹患率および死亡率を低く抑えられるため、硬膜外アプローチを推奨しています。以下に、この非常に複雑な処置を、成功させ、かつ人道的に実施するために必要な材料、動物飼育、および外科的アプローチについて説明します。まず、必要な手術用器材について説明します。動物は、Charles River International Laboratories Incorporated社製の成体雌のDuncan Hartley アルビノモルモットを使用します。部屋の準備と滅菌セットアップには、滅菌済み手術着、滅菌カバー付きの手術用顕微鏡、小型の開口ドレープ、術中加温パッド、および吸引装置が必要です。5番の吸引管、40番の滅菌生理食塩水用吸引管、ステンレス製ボウル、およびヘッドホルダーを用意します。麻酔には、術前にケタミン 60 mg/kg およびキシラジン 12 mg/kg が必要です。術前準備として、石油系眼潤滑剤、電気シェーバー、ベタジン、および 70%エチルアルコールを用意します。術中には、0.25%マーキング液 0.6 mL、11番使い捨てセーフティスカルペル、曲がった止血鉗子 3本、ラーPeriosteal Elevator、WEXsurgical spears、および耳科用ドリルが必要です。また、1.5 mm ダイヤモンドバーおよび 0.5 mm ダイヤモンドバーを使用します。ストレートピック、ボーンキュレット、10 cc シリンジ、ボーンワックス、ゼラチンフォーム、P 13カッター針付きの4-0吸収性縫合糸、アディソン鉗子、ダイヤモンドジョー持針器、および縫合用鋏を用意します。術後ケアには、ウォーミングパッドを備えた清潔なケージが必要です。22.7 mg/mLのインターフロキサシンを0.2 mL用意します。0.3 mg/mLのブプレノルフィンを0.05 mL投与します。まず、ケタミン 60 mg/kgおよびキシラジン 12 mg/kgをモルモットに筋肉内投与して麻酔をかけます。この投与 regimen により、呼吸抑制を伴わずに60分から90分間の麻酔状態を維持でき、通常はこの処置を遂行するのに十分な時間となります。動物を麻酔した後、眼球に石油系潤滑剤を塗布します。次に、電気バリカンを用いて、上部胸部から頭頂部にかけて後頭部を剃毛します。その後、ベタディンで患部を消毒し、続いてアルコールで清拭します。これで動物の手術準備が整いました。私はクリフ・マギリオン博士です。クリーブランドにあるケース・ウェスタン・リザーブ大学病院の耳鼻咽喉・頭頸部外科教授であり、耳科学および神経耳科学のディレクターを務めております。本日は、モルモットにおいて内リンパ水腫を誘発するための外科的手技について解説します。経口外的にアプローチし、Ｓ状静脈洞を露出させ、Ｓ状静脈洞の前方および外側を確認します。内リンパ系の開口部を見つけ出し、管腔組織および嚢組織を除去し、直接視下で管腔をドリルで穿孔します。本手順において最も重要だと考えるのは、シグモイド静脈洞を骨剥離し、その後内側に移動させて、内リンパ管の耳管周囲を直接視認することです。術野の準備が整ったら、動物を手術室に移動させ、ヘッドホルダーに固定します。後頭稜を十分に露出させるために頸部を屈曲させ、動物の健康と安全を確保するため、滅菌状態でドレーピングを行います。処置中の適切な体温を維持するため、人間の患者に求められるものと同様の無菌操作を遵守し、最初の切開前に手術台の下にウォーミングパッドが設置されていることを確認してください。手術部位の周囲にマーキング剤を注入します。手術は、十分な術野を確保するため、後頭部にかけて頭皮の正中背側を切開することから開始します。切開部の両側に止血鉗子を配置して皮膚を牽引します。モルモットは強力な止血機序を持っているため、電気凝固は不要です。次に、頸筋に沿って水平に切開します。後頭骨を露出させるため、適切に切開を行うと、ここに示すように側頭後頭縫合線がすぐに現れます。筋肉の下を通っていることが多い大後頭神経を切断すると、動物が痙攣することがあります。筋肉を切開する際は、十分な麻酔を施していても、刃の下にある骨を確認することが重要です。そうしないと、切開位置が低くなりすぎ、頸部の筋肉を貫通した際に脊髄を切断するリスクがあります。3本目の止血鉗子を用いて切開部位の上端を把握し、手術助手がそれを保持します。鈍的剥離を用いて後頭骨を露出させます。常に外後頭稜の右側に位置すること、および左耳を対照とすることを忘れないでください。本モデルでは、次にランパー式骨膜剥離子を用いて頭蓋をさらに露出し、外後頭稜と側頭後頭縫合線を露出させます。縫合線の直下から、1.5 millimeterのダイヤモンドバーによるドリリングを開始します。目的は、後頭蓋窩および sigmoid sinus を露出させることです。すべてのドリリングは、常に temporal occipital seizure line 上またはそれより下方に留める必要があります。血液を吸引するため、5番のサクションチューブを準備してください。また、助手に滅菌生理食塩水で術野を灌流させます。10 cc シリンジから絶えず滴下させます。ドリリングにより骨髄から出血が生じますが、ダイヤモンドバーを用いて、深さ約 1 mm の部位で出血点を止血することができます。かすかな青い線が見えてきます。これが sigmoid sinus です。そのままお待ちください。シグモイド静脈洞の外側に位置します。内リンパ管の末端を確認することができます。シグモイド静脈洞を穿刺することなく、その辺縁を定義することが重要です。上層の骨が十分に薄くなったら、ドリリングを停止し、サクションを40番に変更します。また、より高い倍率を使用します。ストレートピックを用いて、上層の骨を慎重に除去します。乙状静脈洞を穏やかに内側に牽引すると、開口部（operculum）が現れます。この部分は血液に遮られていることが多く、はっきりと見えない場合があります。ここで、骨膜を剥離した乙状静脈洞を再び穏やかに内側へ牽引し、開口部を露出させます。次に、より小さい0.5の切削ビットを用いて溝をドリルし、内リンパ嚢を破壊しながら、最終的に内リンパ管へと到達させます。管は、周囲の骨の白さの中に暗い楕円形として見えます。管を約1 Millimeter 掘削した後、ボーンワックスを充填します。ゲルフォームを使用して、ボーンワックスを管の中に押し込みます。この内リンパ管の閉塞により、内リンパ水腫が誘発されます。筋肉を接合するために4.0 poly shorb縫合糸を使用します。その後、皮膚切開部に向けて皮下縫合の手法へとスムーズに移行します。この閉鎖法を用いることで、後で縫合糸を抜糸する必要がなくなり、動物が患部を掻いたり、縫合糸やステープルを引っ張り出したりするリスクがなくなります。術後、モルモットは覚醒するまで30分ごとのチェックを行いながら、体温を維持するためにインキュベーターに入れます。動物の呼吸数と体色を確認します。当センターでは、広域スペクトル抗菌薬のininおよび疼痛管理のためのブプレノルフィンを使用しています。他のあらゆる手術と同様に、被験体にはリスクが伴います。そこで、術中に起こりうる合併症とその回避方法について説明します。呼吸抑制についてですが、術者は常に動物の呼吸状態を確認し、呼吸の停止や徐脈がないか注意を払う必要があります。手術を中断し、胸部の動きを視覚的に確認します。動物が無呼吸の状態である場合は、口と気道が閉塞していないかを確認してください。S状静脈洞を穿刺した場合は、出血が止まるまで、吸引チップを用いてジェルフォームによる圧迫止血を行ってください。硬膜貫通部はジェルフォームで覆い、前庭への損傷を防ぎます。乙状静脈洞から外側に1 mmを超えてドリルをかけないでください。さもなければ後半規管を損傷する可能性があり、そのモルモットから得られるすべてのデータが無効になります。モルモットにおける内リンパ管の手術的閉塞は技術的に困難な手術ですが、適切な器具、指導、および関連する解剖学的知識があれば、動物への人道的な配慮と、ヒトのメニエール病のモデルとしての有用性を両立させた方法で実施することが可能です。

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メニエール病の外科的治療選択肢としての内リンパ管閉塞

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鶏胚における神経誘導のためのアッセイ

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内リンパ管の閉塞による内リンパ水腫の外科的誘導

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