Name: マウスにおけるホルター心電図の記録 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-27T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: 学ぶマウスにおけるホルター心電図記録法。テレメーター埋め込み手術とECGリード配置の詳細な手順を解説し、長期心電図モニタリングによる不整脈や突然死の研究に活用できます。

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1。外科的移植のためのテレメーターの調製<ol><li>マウスに心電図テレメータを挿入する前に、それは、心電図テレメータは無菌と良好な状態にあることを確認することが重要です。新しいテレメトリ装置は、通常、製造元によって無菌状態で提供されています。心電図テレメーターは、デバイスが少なくとも4時間Tergazyme 1％溶液を用いて洗浄されていれ再利用することができます。あなたがTergazymeで洗浄した後、滅菌水でテレメータを洗うことができる。さらに、心電図テレメータを殺菌するために一晩Wavicide - 01消毒剤を使用。 48時間のマウスに移植する前に、滅菌水で消毒剤を洗い落とすようにしてください。滅菌容器に保管する。 </li><li>テレメータをチェックし、両方の導線の整合性と絶縁シースにつながります。磁石テレメータの5cm以内に手を振ってを使用してテレメトリ送信機の電源を入れ、AMラジオ、周波数530との信号をテストします。信号は強いと明確にする必要がありますし、強度とワイヤの操作に基づいてピッチに変化するはずです。モデル番号、テレメータシリアル番号、および心電図の較正値を記録します。メーカーはしばしば、テレメーターは、移植前に24時間の上にあることをお勧めします、詳細については、特定のテレメータの取扱説明書を参照してください。この例では、我々は、移植のためのデータサイエンスインターナショナル（DSI）テレメータを使用します。 </li><li>テレメータリードの準備は約3.5 cmおよび2.5センチメートルに正（赤）リード線にマイナス（白）のリード線を切断することによって達成することができる。これらは、右胸の負極リードの注入、及び左腹部のプラス側のリード線（図2参照）のための最適な長さです。次に、ワイヤーの7 mmを公開するために絶縁被覆を除去。そのような獣医-ボンドのような無菌瞬間接着剤、金属製のリードの端をペイントして、金属の先端に鉛ダストキャップを取り付け。これらのキャップは、配置を導くために起因する皮膚の浸食を避けることができます。約2〜3mmの金属線は、ネイティブの心臓のリズムの電気的検出用に公開される必要があります。 </li></ol> 2。テレメータの外科的移植<ol><li>マウス手術で無菌操作を使用するためには、滅菌手袋、滅菌ドレープ、および6から0 Prolene縫合が必要になります。また、滅菌ピンセット、先の尖っていないハサミの1ペア、メス、および針のドライバの2ペアが必要になります。手術器具は、摂氏250度に加熱ガラスビーズ滅菌器で滅菌することができる。以前、使用前に説明したようにテレメータを殺菌し、洗浄してください。 </li><li>最初の0.5 L /分100％O2でイソフルラン3％使用してインダクションボックスにマウスを麻酔による手術のためのマウスを準備します。麻酔マウスの温度を維持するために、そのような暖かい水を循環させるT -ポンプとして、加熱パッドを使用してください。必要に応じて温度は、直腸プローブによって監視されることがあります。マウスが十分に鎮静されている場合、完全に電気バリカンでマウスの腹部と胸部を削る。頭が離れて直面しているとあなたに向かって尾で、仰臥位、一定のフローチューブにマウスを転送する前に、イソフルランでマウスを再度麻酔。加熱された手術台にマウスの足ダウンテープ。剃毛毛を削除すると術野をきれいにアルコール綿で腹部を拭きます。腹部と胸部を消毒するために綿棒でbetadineの3つの別々のコートを適用します。マウスの爪床に圧力を適用することによって、麻酔の正しいレベルを確認してください。マウスが手術のために準備された後、滅菌手袋を使用し、手術野に滅菌ドレープを適用する。 </li><li>腹腔内テレメータの注入は、運動生理学の実験の利点を提供しています。腹腔内挿入のために、長さの腹部約2.5センチメートルを覆う皮膚に垂直正中切開を作成するためにメスを使用して手術を始めます。先の尖っていないハサミを使用して、基になる結合組織から慎重に別の皮膚。その後、、長さが約1.5 cmの腹膜を覆う白線の垂直正中切開を作成します。また、皮下のリードのための出口となる腹膜切開、に（脳神経）のすぐ上腹膜に小さな穴を作成します。手術を行っている間、時折動作フィールドに滅菌生理食塩水を滴下して手術部位の潤いを保つ。 </li><li>右腹腔内にテレメーターを挿入します。テレメータに優れた穴に鉗子を挿入し、それらが腹膜から突出しているように、リード穴に通し、両方のリード線をプルアップ。 1.5センチメートル腹膜垂直正中切開を閉じるために、連続6から0 Prolene縫合糸を使用してください。 </li></ol> 3。注入と腹部閉鎖をリード<ol><li> ECGのリードは、リードIIの構成で配置されます。白/透明シースと鉛は負であり、左上腹部に置かれます。最初に、マウスの右胸に0.5 cmの皮膚切開を作成します。次に、腹部切開に戻ってトンネルを作成する鈍はさみを使用してください。トンネルを経由してリードを引いて、胸筋にリードを固定するために6から0 Proleneの縫合糸を使用してください。縫合糸は、リードの露出部分の上にある、鉛及び基本的な筋肉の間の良好な接触を作成することを確認してください。筋肉にリードを固定するために、前述のものに近位第二縫合糸を使用してください。 6から0 Proleneの縫合糸を使用して皮膚切開を閉じます。 </li><li>プラス側のリード線（赤シース）は左横隔膜下と心臓の下の左腹部に配置されます。リードは6から0 Proleneの縫合によって下にある腹膜組織に固定されており、腹膜組織との良好な接触を持つ必要があります。鉛注入のサイトはこのように簡単に既存の手術野でアクセスすることが、垂直正中切開に近いため、追加の切開は、このステップでは必要ありません。腹膜組織の基盤となる腸の穿孔を避けるために、解除する必要があることに注意してください。 </li><li>層の6から0 Proleneで順次腹部筋膜と皮膚を閉じます。 </li></ol> 4。術後ケア<ol><li> [1 mg / mLの]手術直後鎮痛のためのブプレノルフィンのマウス0.1mLを与える。マウスは、加熱されたパッドの手術から回復することができます。マウスは長時間手術&gt; 30分、またはマウスが乾いた表示される場合は、水分補給のための腹膜に0.2から0.3 mLの滅菌生理食塩水を注入する可能性を持っている場合。継続的な術後の鎮痛のためには、3日間1日2回ブプレノルフィンとマウスを提供する標準的な手法であり、その後8時間ごとに必要に応じて。 </li><li>手術後の炎症を避けるために、アルコール綿棒でbetadineを拭き取ります。手術後の健康のその後の決定のための外科手術後の体重を記録してください。 </li><li>手術後8〜24時間、必要な時にブプレノルフィンとマウスの追加鎮痛を与える、これは痛みを軽減し、マウスのclawing後の手術部位でのリードの配置の失敗を削減するとして。 </li></ol> 5。代表的な結果皮下の皮膚の下にリードを正しく実行するとき、マウスは腹部切開を閉じているはずです。通常、マウスは麻酔から回復するために10〜30分かかります。マウスは完全に手術から回復している前にそれは、モビリティの術後の体重減少と正規化の回復によって証明される、約7〜10日かかる。 手術から最も一般的な合併症は、手術後の最初の10日間の皮膚からの手足のリード線の浸食です。この一般的な合併症は、しっかりと皮下に皮下組織や腹膜につながる付着することで回避することができます。この手法は、マウスがambulates時に皮膚への圧力と摩擦を作成スラックリード線を、避けることができます。あまり一般的で、感染症や敗血症は無菌操作でエラーが発生し、または使用するテレメータの不完全な洗浄から発生する可能性がありますが。 心電図の出力は、データサイエンスインターナショナル（DSI）のようなデータ収集ソフトウェアと結合受信機の行列、記録することができる。波形の結果は、明確に定義されたP波、心房脱分極を示す、また、下の図3に示すように、心室脱分極を、意味するQRS波を含める必要があります。良質ECGトレースが1:1の割合で明確に定義されたQRS波の前に明確に定義されたP波を持つ必要があります。低いバックグラウンドシグナルとRR間隔が野生型マウスでは定期的にあるべき存在するはずです。質の悪いECGトレースは、その後のコンピュータ解析を困難にすることが不明瞭なPやQRS波、またはバックグラウンド信号を、可能性があります。貧しいECGトレースは通常、再注入するテレメータのリード、一度で固定してもよい。テレメータリードを再移植する、麻酔下でマウスを置いて、手術手技を使用して、直接問題の鉛を覆う皮膚に切開を行います。リード線がアクセスされると、リードをアンカー縫合糸を切断し、再びリードを固定する前に目的の場所にリードを移動する。最後に、6から0 Proleneで手術部位を閉じてください。 <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig1.jpg" alt="図1"> 図1：正と負のリード線と小動物のテレメーターの例。一般的には、赤いリード線は、正極リードであり、そして白のリード線は負のリードです。各リード線はむき出しになったワイヤの絶縁被覆、5-7 mmとし、皮膚を通して、鉛の侵食を防止するプラスチックキャップの先端を、持つ必要があります。 <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig2.jpg" alt="図2"> 図2：マウスで適切なテレメータ注入部位を示す漫画。白（負の）リードは、マウスの右胸の上部に注入される、と赤（正の）リードは、テレメータの感覚その左腹部、"鉛の二つの"構成で配置されます。 &lt;Pクラス="jove_content"&gt; <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig3.jpg" alt="図3"> 図3：正常洞調律のマウスの代表波形。 P波は心房脱分極を表し、QRS波は心室の脱分極を表しています。高品質の波形は、1:1の比率でそれぞれのQRS波の前に明確なP波を持つ必要があります。

<ol><li>Cerrone, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+ventricular+tachycardia+and+fibrillation+elicited+in+a+knock-in+mouse+model+carrier+of+a+mutation+in+the+cardiac+ryanodine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor.</a> Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).</li>
<li>Chelu, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calmodulin+kinase+II-mediated+sarcoplasmic+reticulum+Ca2%2B+leak+promotes+atrial+fibrillation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).</li>
<li>Sood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+calcium+leak+due+to+FKBP12.6+deficiency+in+mice+facilitates+the+inducibility+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).</li>
<li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+changes+during+daily+torpor+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).</li>
<li>Costa-Goncalves, da, C, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+multidomain+protein+spinophilin+in+blood+pressure+and+cardiac+function+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation.</a> Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).</li>
<li>Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+electrocardiography%3A+an+interval+of+thirty+years%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse electrocardiography: an interval of thirty years.</a> Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).</li>
</ol>

この手順の重要なステップは、生存の手術前にマウスの適切な洗浄と準備です。テレメータとマウス手術部位が適切に洗浄されている場合、より良い手術後の転帰があります。さらに、配置を導くために細心の注意は、外科手術後の皮膚の侵食を軽減。技術への可能な変更は、ECG波形解析のためだけでなく、温度、さらには血圧の解析のためだけでなく、横方向のLV壁の機能を（私の構成を導く）の評価、ま​​たはテレメーターを使用する代替の構成が含まれています[この記事の範囲を超えて] 。 ECGテレメトリー記録用の代替場所皮下には、外部配線と配置を導く、非注入テレメータをIEです。これは、新生児の心電図波形の記録に適しています、しかし、ホルター心電図テレメトリのための実用的ではありません。 テレメータ注入は、ホルター心電図モニタリングのための強力なツールであり、そして、突然心臓死、AV結節ブロック、および心房細動の心室頻拍の発生を評価するために使用されています。加えて1,2,3、テレメトリ解析のアプリケーションでは、貴重なデータが得られている心拍数と心拍変動の制御に関する。心電図テレメーター技...

<table><tbody><tr><td>Steri 250 ビーズ滅菌器</td><td>Inotech</td><td>IS-250</td><td></td></tr><tr><td>鈍端剪刀</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5980</td><td></td></tr><tr><td>鈍端鉗子（2本）</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5138</td><td></td></tr><tr><td>動物用麻酔気化器</td><td>Surgivet</td><td>Isotec 4</td><td></td></tr><tr><td>T/ポンプ</td><td>Gaymar Industries</td><td>P/N11184-000</td><td></td></tr><tr><td>プロピレン青単繊維縫合糸</td><td>Ethicon Inc.</td><td>8718</td><td></td></tr><tr><td>ポビドンヨード 10%</td><td>等しくする</td><td>翻訳するソーステキストが提供されておりません。翻訳対象のテキストをご提示ください。</td><td></td></tr><tr><td>アルコール綿</td><td>PDI</td><td>B339</td><td></td></tr><tr><td>Tergazyme</td><td>Alconox, Inc.</td><td>21837-118</td><td></td></tr><tr><td>Wavidicde-01</td><td>Medical Chemical Corporation</td><td>Wavicide-01</td><td></td></tr><tr><td>心電図テレメータ</td><td>DataSciences International</td><td>EA-F20</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおけるホルター心電図の記録

Ambulatory ECG Recording in Mice

マウスの遠隔計測心電図記録は、不整脈、伝導障害、そして心臓突然死の背後にあるメカニズムを理解するために不可欠です。表面心電図は、波形の間隔の短期的な測定のために利用されていますが、それは、心拍変動や不整脈の珍しいエピソードのキャプチャの長期的研究のために実用的ではありません。埋め込み型心電図テレメーターは、単純な外科的移植、外来マウスのelectrogramsの長期的な記録、および複数の動物の同時録画とスケーラビリティの利点があります。ここで、我々は、マウスのホルター心電図記録用テレメータの注入へのステップバイステップガイドを紹介。無菌操作に細心の注意を順守は数週間から数ヶ月に注入し、記録の可能性と良好な生存率の結果が必要です。このように、埋め込み型心電図テレメトリは、マウスなどの外来動物モデルにおける心臓電気生理学に関する重要な情報を検出するための貴重なツールです。

遠隔測定心電図は心​​臓の不整脈や心臓突然死のために動物モデルを評価する上で不可欠なツールとして浮上している。ここで、我々は、マウスの長期的、ホルター心電図モニタリングのアプリケーションのための測定ECG記録への段階的なガイドを提示する。

マウスにおけるテレメトリー心電図（ECG）記録は、不整脈、伝導障害、および心臓突然死の背後にあるメカニズムを理解するために不可欠です。しかしながら……

マウスを脱毛させ、麻酔をかけ、予定の手術部位である腹部と胸部を滅菌してビーコン手術を行います。メスを用いて腹部に正中縦切開を加え、腹膜を露出させます。さらに、テレメーターを挿入するため、腹膜に正中縦切開を加えます。TERを腹膜下の右腹部に挿入し、リード線のみを露出させた状態にします。腹膜を閉じた後、TERリードを皮下植え込みします。陰極（白色リード）を右側胸部上方に、陽極（赤色リード）を左側上腹部に植え込みます。最後に、皮膚を縫合して閉じます。こんにちは。ベイラー医科大学内科学部のXandr Wearan研究室のMark McCauleyです。本日は、マウスに心電図（ECG）テレメトリー送信機を植え込む手法について説明します。この手法を用いて、マウスの心拍数や心拍リズムの変化を研究します。それでは、始めていきましょう。マウスにECG TERを挿入する前に、TERが滅菌されており、正常に動作することを確認することが重要です。これは、赤色の正極リードと白色の負極リードを備えたData Sciences International社製小型動物用テレメータの例です。各リードには絶縁シース、2 mmの露出した電線、およびプラスチック製のキャップ付きチップがあり、これにより皮膚を介したリードの摩耗が防止されます。新しいテレメトリーデバイスは通常、製造業者によって滅菌状態で提供されますが、TERsはzyme 1%溶液を用いて4時間以上空気洗浄することで再利用が可能です。さらに、ECGテレメーターを滅菌させるために、WA OFI O one消毒液を一夜浸漬させて使用してください。マウスに植え込む前に、必ず滅菌水で消毒液を洗い流してください。テレメータリードの導電線と絶縁被覆の両方に損傷がないか確認します。磁石を使用してテレメトリー送信機をオンにし、AMラジオの周波数530で信号をテストします。信号は強く明瞭である必要があり、電線を操作することで強度とピッチが変化することを確認してください。モデル番号、TERシリアル番号、およびECG校正値を記録します。該当する場合、メーカーは多くの場合、植込みの24時間前からTERをオンにしておくことを推奨しています。お使いのTERの取扱説明書を参照してください。TERリードを準備するために、陰極（白色）リードを約3.5 cmに、陽極（赤色）リードを2.5 cmに切断します。これらの長さは、陰極リードを右胸に、陽極リードを左腹部に植え込むための最適な長さです。次に、絶縁被覆を取り除き、7 mmのワイヤを露出させます。金属リードの端に瞬間接着剤を塗り、金属チップにリードキャップを取り付けます。これらのキャップにより、リードの留置による皮膚の浸食を防ぐことができます。心拍の電気的センシングを行うため、金属ワイヤーを約2〜3 mm露出させておきます。手術においては、無菌操作の徹底が極めて重要です。テレメーターの植込みには、滅菌手袋、滅菌ドレープ、および6-0 proline 縫合糸が必要となります。すべての手術器具は、250 °Cに加熱されたグラスビード滅菌機で滅菌してください。これらには、2対のピンセット、1本の鈍端剪刀、メス、および持針器が含まれます。事前に説明した通り、TERを滅菌および洗浄してください。これらを用いてマウスの手術準備を行います。まず、導入ボックス内で動物を麻酔させます。足先をつまんでマウスが十分に鎮静されていることを確認した後、バリカンを用いてマウスの腹部と胸部を完全に除毛します。続いて、イソフルランでマウスを再麻酔し、定流量麻酔チューブへ移します。マウスを仰臥位に置き、頭を遠くに、尾を自分側に向けて配置します。マウスの肢を加熱手術台にテープで固定します。ヒーティングパッドを使用して、麻酔下にある動物の体温を37 ± 1 °Cの狭い範囲内に維持します。直腸プローブを使用して体温をモニターさせ、アルコール綿で腹部を拭き、除毛した毛の除去および術野の清浄化を行います。綿棒を用いてベタジンを3回塗布し、腹部と胸部を消毒します。腹腔内へのトーター植え込みのため、マウスの腹部に滅菌ドレープを適用します。まず、メスを用いて腹部の皮膚に長さ約2.5 cmの垂直正中切開を加え、鈍端の外科用はさみを使用して切開します。皮膚を下の結合組織から慎重に剥離します。次に、腹膜上の腹壁正中に、長さ約1.5 cmの垂直正中切開を加えます。さらに、腹膜切開部のすぐ頭側に、皮下リードの出口となる小さな穴を腹膜に開けます。手術中は、術野に随時滅菌生理食塩水を滴下し、湿潤状態を維持してください。TERを右腹腔内に挿入します。ピンセットをTERの上方の穴に挿入し、2本のリードをリード穴から引き上げ、腹膜から突出させます。1.5 cmの腹膜正中縦切開創を閉じるために、6-0プロリン縫合糸を用いて連続縫合を行います。ECGリードをリードIIの構成で配置します。白い透明なシースで覆われたネガティブリードを右胸部に配置します。まず、マウスの右上胸部に0.5 centimeterの皮膚切開を加えます。次に、鈍端剪刀を用いて、腹部の切開部位までトンネルを作成します。マイナス電極のリードをトンネルに通し、6-0プロレン縫合糸を用いてリードを胸筋に固定します。縫合糸がリードの露出部分の上にあり、露出した金属線と下層の筋肉との間で十分な接触が確保されていることを確認してください。前の縫合部位の近位に2本目の縫合糸を用い、リードを筋肉に固定します。3-0のプロリン縫合糸を用いて、皮膚切開部を2箇所縫合して閉じます。陽極リードは、左横隔膜の下、心臓の下の左腹腔内に留置します。リードの植え込み部位は正中切開部位に近いため、ここに追加の切開を行う必要はありません。6-0 プロリン縫合糸を用いてリードを腹壁筋に固定し、組織と十分に接触していることを確認します。最後に、6-0 プロリン縫合糸を用いて腹壁筋と皮膚を順に層状に縫合し、閉鎖します。プロトコル本文に記載されている通り、マウスに適切な術後ケアを行ってください。次に、正常な心電図（ECG）波形の代表的な結果を示します。野生型マウスの正常な心電図では、心房の脱分極を表すP波が明確に現れ、それに続いて心室の脱分極を表すQRS波が現れます。P波とQRS波が小さなバックグラウンドノイズと明確に区別されており、各P波が各QRS波に1対1の比率で先行していることに注目してください。また、R波間の距離（R-R間隔）およびP波間の距離（洞サイクル長）が一定であることから、マウスが正常洞調律であることに注目してください。以上で、外来ECG記録のためにマウスにECGテレメトリー装置を植え込む方法を説明しました。この処置を行う際は、挿入前にテレメトリー装置を十分に洗浄すること、リード線を適切な位置に配置すること、腹部を完全に閉鎖すること、そして最後に処置後のマウスに適切な鎮痛剤を投与することが重要です。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功を願っております。

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