赤血球凝集アッセイを用いて血清の反応性と力価の決定

ヘマグルチニンアッセイを用いた血清の反応性および力価の決定。グルテン国とは、可溶性抗体と粒子状抗原の間で起こる反応です。これらには、細胞や分子を運ぶものが含まれます。

キャリアの表面にあるエピトープにより、抗体はキャリアに結合して架橋し、抗原抗体複合体と呼ばれる複雑な格子が形成されます。ヘム凝集は、抗体が赤血球に結合し、赤血球が粒子抗原として作用する特定の形態の凝集です。赤血球は、どちらもすぐに入手でき、結果を肉眼で簡単に確認できるため、有用なターゲットです。

血清サンプルを段階希釈した後、96ウェルuboプレートに入れます。次に、赤血球の懸濁液をRiva細胞に加えます。抗体が高濃度で存在すると、赤血球に結合して大きな格子が形成されます。

この格子が重力によって沈降すると、ウボプレートの形状に適合します。上から見ると、赤血球の広いシートが見えます。これは陽性のヘマグルチニン反応です。

抗体レベルが低いと、格子が形成されず、赤血球がUBOプレートの形状に順応して基部に集中し、小さなペレットを形成します。これは負の裾凝集反応です。この図は肯定的な反応を示しています。

セルは沈降すると格子を形成し、U底板の形状に適合します。左と右には、赤血球の広いシートが見られる上面図があります。中程度の量の抗体が存在する場合、いくつかの文字の形成が観察されます。

ヘム凝集により、既知の抗原に対するさまざまな血清サンプルの反応性も試験できます。血清サンプルの力価も決定できます。力価は、陽性反応が見られた最後の希釈液です。

通常、血清サンプル中の抗体濃度が高いほど、力価は高くなります。この図は、負のヘム凝集反応を示しています。赤血球を架橋するための抗体が不十分である。

細胞が重力によって沈殿すると、細胞は井戸の側面を滑り落ち、底部にタイトなペレットを形成します。右の図は、上から見たときの赤血球を示しています。この実験には、1 96ウェルU底板が必要です。

平らな底板は細胞がペレットに沈殿するのを許さず、解釈が不可能になるため、U底板を使用することが不可欠です。50マイクロリットルのテスト血清、Riva細胞の1%懸濁液、およびベロン緩衝生理食塩水の1回限りの溶液を列の各ウェルに送達できるペット。1対12で、50マイクロリットルのロアルバッファー生理食塩水を供給します。

これは希釈剤として使用されます。次に、50マイクロリットルの血清を井戸に入れます。これは、2つの希釈の最初の1つです。

パーペットを使用して、血清サンプルが完全に混合されていることを確認します。混合したら、Aウェル1から50マイクロリットルを取り出し、Aウェル2に移します。これは2回分の2回目の希釈で、4倍の希釈になります。

この希釈シリーズを、ウェル3から11までを使用して続けます。これはあなたのロアルバッファー生理食塩水ネガティブコントロールであるため、12に血清を入れないでください。次に、十分に混合されたRiva細胞の1%懸濁液を取り、50マイクロリットルを1つからA12まで移します。

細胞が添加されたら、プレートを覆い、プレートを軽くたたいて、サンプルと細胞が混合されていることを確認します。次に、37度で60分間インキュベートします。加湿インキュベーターが適切です。

60分間のインキュベーション期間中に、抗原抗体の相互作用が起こり、細胞が沈殿し始めます。ご覧いただいている動画は、60分間のタイムラプス撮影です。これは、井戸5から10までのクローズアップです。

私たちはすでに、まあ、12、これはあなたのVBSコントロールでした。さて、細胞はタイトなペレットを形成しており、アッセイが適切に機能していたことを示しています。ウェル5とウェル6は、ポジティブな裾の凝集の例です。

まあ、7は中間の凝集結果の一例であり、ウェル8、9、および10はヘム凝集に対して陰性です。この結果に基づいて、力価は、正の反応が観察された最後の井戸であったため、ウェルの希釈率(7)に基づいて決定されます。