同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

この手順の全体的な目的は、移植血管病の発症を調査するための正確なモデルと、容易に実施可能な手法を確立することです。これは、PVG系統とCI系統を組み合わせることで達成されます。本手順の次のステップは、ドナーの大動脈を採取することです。

手順の3番目のステップは、レシピエントの準備です。手順の最終ステップは、ドナーの大動脈とレシピエントの大動脈を吻合させることです。最終的に、病理組織学的検査を用いて、新生内膜の形成を示す結果を得ることができます。

こんにちは。私はドイツのハンブルク大学心臓センター、Thet Eye Labで移植免疫学の教授を務めているソニア・シュヴェフェルです。そして私はマニシュ・デュボフです。同じくTS Eye Labの所属です。

私の研究室では、移植免疫に関心を持っています。このビデオでは、Wistar系ラットにおける移植血管障害の発達を研究するための、簡便で妥当なモデルである同所性大動脈移植モデルについて紹介します。当研究室では、心血管移植における慢性拒絶反応を調査するためにこの手法を用いています。

同所性大動脈移植モデルでは、大動脈の組織学的評価が容易に行えます。さらに、CIモデルへのPVG移植は、移植血管障害の研究に特に有用です。これは、急性血管拒絶反応が主要な混絡要因とならず、血管障害の発現が臨床での所見と類似しているためです。

それでは始めましょう。この正位（ORTHOTOPIC）大動脈移植に使用するドナーは、体重約250～300 gのPVGラットです。動物を麻酔した後、腹部および胸部の被毛を剃ってください。

ラットを仰向けに固定し、鼻と口にフェイスマスクを装着します。麻酔を維持しながら、腹部および胸部をProvoヨードで広範囲に消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。次に、後肢をつまんで動物の反射を確認します。

十分に麻酔がかかっていることを確認します。腹部を開き、腹大動脈に穴を開けてラットを失血死させます。慎重に胸腔を開き、下行胸大動脈を探します。

胸部大動脈を、脂肪、神経、食道などの周囲組織から剥離します。大動脈に組織損傷を与えないよう、acutaを用いて大動脈を1.5 centimeter切り出します。大動脈グラフトを冷生理食塩水で十分に灌流し、4 °Cで保存します。

この正位大動脈移植のレシピエントには、体重約250〜300 gのA CIラットを用います。まず、麻酔をかけたラットの腹部を剃毛し、麻酔中の眼球乾燥を防ぐために眼軟膏を塗布します。ラットを仰向けに固定し、鼻と口にフェイスマスクを装着して麻酔を維持します。

次に、ポビドンヨードで腹部を消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。後肢をつまんでラットが十分に麻酔されていることを確認した後、腹部正中切開を行い、皮膚と筋肉を分離して腹部を開きます。2ステップ。

腹部を切開した後、腸管を生理食塩水を入れた手袋の中に移動させます。水分の喪失を防ぐため、手袋を腸管に巻き付けて覆います。腹大動脈を覆っている脂肪組織を除去します。

腎下領域から分岐部まで大動脈を剥離し、血管の分枝を損傷させないよう注意してください。必要に応じて、大動脈を剥離した後に大動脈の分枝を結紮します。まず、大動脈の腎下部分にマイクロサージカルクランプを使用し、血流を遮断します。

次に、大動脈の分岐点の近くに2つ目のクランプを配置します。血流を停止させた状態で、大動脈の短いセグメントを切除します。その後、氷上の0.9%生理食塩水で保存しておいたドナーの大動脈グラフトを用意します。

適切な長さに切り詰め、大動脈の欠損部に配置します。まず頭側端端吻合から行い、8-0 Proleneを用いて連続縫合し、ドナー大動脈とレシピエント大動脈を接続します。遠位端端吻合が完了したら、慎重に遠位クランプを開放します。

次に、頭側クランプを慎重に開放します。大動脈の遠位端に拍動が見られるはずです。続いて、腸管を腹腔内に戻し、あらかじめ温めておいた滅菌生理食塩水で腹腔内を洗浄します。

6-0プロリン縫合糸を用いて、腹壁の筋肉層を連続縫合で閉鎖します。次に、ラットが麻酔下にある間に、5-0プロリン縫合糸を用いて皮膚を連続縫合で閉鎖します。カルプロフェンを4〜5 mg/kgの用量で皮下注射します。

動物をケージに戻します。鎮痛剤として、3日間、飲用水にメチマゾールを添加します。移植後。

120日後の組織病理学的結果を、組織顕微鏡を用いて提示します。画像では、移植血管障害の進展が明確に示されます。生じた管腔狭窄については、コンピューターアニメーションを用いて強調表示します。

以上で、ラットにおけるオートトピック大動脈移植の手順を説明しました。また、組織病理学を用いて、120日後に移植血管障害が正常に誘発されることを実証しました。この手法により、慢性同種移植血管障害に対する薬剤の初期効果を検討することが可能になります。