Name: 同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶラットの同所性大動脈移植モデルによる移植血管症の発生メカニズム。PVGからCI系統への移植で新内膜形成を観察し、慢性拒絶反応の病理を解明する実験手法を詳しく解説します。

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著者は、彼女の組織学的仕事のためクリスティPahrmannに感謝。 資金ソーニャSchrepferは、ドイツ学術振興協会（DFG）（SCHR992 / 3 1及びSCHR992/4-1）から研究助成を受けています。]

約250〜300グラムの重さのラットを、チャールズリバー（Sandhoferウェグ7、D - 97633 Sulzfeld）から購入しています。 移植は、レシピエントのドナー、およびACIラットとしてPVGラットを使用して実行されます。 ラットは通常の条件、飼育標準ラット固形飼料および水を自由libidum下に収容されています。 すべての手術器具は使用前に滅菌されています。 ドナーの準備： 誘導チャンバーを用いて（2,5-3％）イソフルランでラットを麻酔。 <ol><li>腹部と胸部の毛を剃ると、その背中にラットを配置し、麻酔を維持するために、その鼻と口にフェイスマスクを置く。 </li><li>広くプロボ-ヨウ素を使用して腹部と胸部領域を駆除する、次回の使用の80％エタノール、このステップを3回繰り返します。 </li><li>ラットがanesthesized十分であることを確認するために後肢の足をつまんで反射神経をチェックしてください。 </li><li>腹部を開いて腹部大動脈に穴をカットすることでラットを放血させる。 </li><li>慎重に下行胸部大動脈を見つけるために胸部を開きます。 </li><li>脂肪、神経、食道などの周囲の組織から胸部大動脈を解剖。 </li><li>大動脈の組織のダメージを与えることなく、肘当てを使用して大動脈の1.5センチメートル一部を撤回する。 </li><li>冷滅菌生理食塩水で十分に大動脈移植を灌流と4でグラフト℃にて保存してください。 </li></ol>受信者： 誘導チャンバーを用いて（2,5-3％）イソフルランでラットを麻酔。体温は、手術中維持されます。 <ol><li>腹部領域のひげをそると麻酔中に乾燥から目を防ぐために、眼軟膏を適用する。 </li><li>その背中にネズミを置き、麻酔を維持するために、その鼻と口にフェイスマスクを置く。 </li><li>このステップを3回繰り返す、80％エタノールを使用する次のプロボ、ヨウ素を使用して腹部を、消毒。 </li><li>ラットがanesthesized十分であることを確認するために後肢の足をつまんで反射神経をチェックしてください。 </li><li>腹部を開くには二つのステップで皮膚や筋肉を分離正中腹部切開を行います。 </li><li>暖めた生理食塩水しっとりパウダーフリー手袋で腸を置きます。水分の損失を防ぐために、腸の周りに手袋を折る。 </li><li>腹部大動脈をカバーする脂肪組織を削除します。 </li><li>大動脈の血管の枝にダメージを与えるように注意して、分岐する大動脈領域を形成する解剖。 </li><li>大動脈の必要なライゲーション枝場合。 </li><li>最初の血流を停止するには解離した大動脈の大動脈部分に顕微クランプを使用してください。 </li><li>次に、大動脈の分岐部に近い秒クランプを配置します。 </li><li>今すぐ血流が停止していることを、大動脈の短いセグメントを削除します。 </li><li>氷の上に0.9％滅菌生理食塩水に保たれているドナーの大動脈移植片を、取る、適切な長さに短縮し、ギャップに配置します。 </li><li> 8から0 proleneの縫合糸（エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ）を使用して実行中の縫合を行う、受信者の大動脈へのドナーの大動脈を接続します。頭蓋エンドツーエンドの吻合で始まります。 </li><li>遠位端々吻合が終了すると、慎重に遠位クランプを開きます。 </li><li>出血は、遠位クランプを開いた後がないときは、慎重に頭蓋クランプを開きます。縫合糸で出血の場合には、出血を見つけ、一つのステッチを使用して出血を止める、再びクランプを閉じます。 </li><li>大動脈の遠位端に表示されるパルスがあるはずです。 </li><li>次の腹部に戻して腸を動かす。 </li><li>温めておいた滅菌生理食塩水で腹部をフラッシュします。 </li><li> 6から0 prolene実行中の縫合糸（エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ）を使用して腹壁の筋層を閉じます。 </li><li>皮膚を閉じるには、縫合糸を実行している5から0 prolene（エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ）を使用してください。 </li><li>ラットが麻酔に入れたまま、皮下カルプロフェンを4-5mg/kg注入する。 </li><li>手順のこのタイプのための十分な鎮痛を提供するために、metamizolは3日後に移植のための鎮痛薬のための飲料水（100mlあたり50mgのMetamizol）に追加されます。 </li></ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

いくつかの理由のために我々は、同所性大動脈移植モデルの異所性心移植モデルに比べてTVPの開発を調査するため、より正確な方法を見つけました。 手術手技に関しては、大動脈移植モデルでは、異所性心臓移植モデルは外科医のスキルに、より複雑でエラーが発生しやすい課題を考えることができるのに対し、単独でエンドツーエンド吻合の成果を必要とする、容易に実現可能な方法を具体化、二つの大きな血管に端側吻合を必要とする。 移植の血管障害が1つの唯一の定義された直径の容器の代わりに、目的を得ることで研究者には不利ができる大きさと憲法の広大な変化を示す多数の小さな心臓の血管の探査で検討されることがありますので、組織学的標本の分析および測定を大幅に促進されると信頼できる結果。異所性心臓移植モデルではそれは大きな個体間変動の根底にある周囲や心筋の血管を比較することは困難である一方、受信者の胸部大動脈は、直径と形態学的外観の比較の容易で信頼性の高いオブジェクトを提供し、通常のコントロールとして機能することができる。 これらの所見に加えて、大動脈同...

<table><tbody><tr><td>手術用顕微鏡（倍率 25x）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>シェーバー</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポビドンヨード</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氷冷 0.9% 生理食塩水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>加温済み 0.9% 滅菌生理食塩水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼軟膏</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>グローブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロサージカル鋏</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピンセット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>クランプ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 縫合糸（プロレン）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 縫合糸（プロレン）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 縫合糸（プロレン）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>カロプロフェン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>メタミゾール</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

慢性拒絶反応の研究のモデルは、移植の血管障害（TVP）の開発中にpathobiologicalと病態生理学的プロセスを調査するために不可欠です。 心臓血管の慢性拒絶反応の研究のために一般的に使用される動物モデルは、実験用げっ歯類で行わ異所性心移植モデルです。小野とリンジー（3）それらの技法を発表して以来、このモデルは実験で広く使用されています。血管での調査結果を分析するために、心臓を切片にする必要がありますし、すべての船舶は、測定する必要があります。 心血管questioningsの慢性拒絶反応を調査する別の方法では、大動脈移植モデル（1,2）である。同所性大動脈移植モデルでは、大動脈を容易に組織学的に（2）評価することができます。急性血管性拒絶反応は、我々は臨床の現場で見つかったものと似てCAVの発症を予防していない主要な交絡因子とシクロス​​ポリンA（CSA）の治療、（4ではないのでPVG -に- ACIモデルは、CAVの研究に特に便利です。 ）。 CsAのA7日間は、急性拒絶反応を防ぐためとTVPの開発と長期生存を達成するために、このモデルでは必須です。 このモデルはまた、異種のモデル（5）における急性細胞性拒絶反応とメディアの壊死を調査するために使用することができます。

このビデオでは、ラットでは移植の血管障害（TVP）の開発を研究するための単純なモデルとして同所性大動脈移植モデルを示しています。

慢性拒絶反応のリサーチモデルは、移植片の形成過程における病理学的および病態生理学的プロセスを調査する上で不可欠である。

この手順の全体的な目的は、移植血管病の発症を調査するための正確なモデルと、容易に実施可能な手法を確立することです。これは、PVG系統とCI系統を組み合わせることで達成されます。本手順の次のステップは、ドナーの大動脈を採取することです。手順の3番目のステップは、レシピエントの準備です。手順の最終ステップは、ドナーの大動脈とレシピエントの大動脈を吻合させることです。最終的に、病理組織学的検査を用いて、新生内膜の形成を示す結果を得ることができます。こんにちは。私はドイツのハンブルク大学心臓センター、Thet Eye Labで移植免疫学の教授を務めているソニア・シュヴェフェルです。そして私はマニシュ・デュボフです。同じくTS Eye Labの所属です。私の研究室では、移植免疫に関心を持っています。このビデオでは、Wistar系ラットにおける移植血管障害の発達を研究するための、簡便で妥当なモデルである同所性大動脈移植モデルについて紹介します。当研究室では、心血管移植における慢性拒絶反応を調査するためにこの手法を用いています。同所性大動脈移植モデルでは、大動脈の組織学的評価が容易に行えます。さらに、CIモデルへのPVG移植は、移植血管障害の研究に特に有用です。これは、急性血管拒絶反応が主要な混絡要因とならず、血管障害の発現が臨床での所見と類似しているためです。それでは始めましょう。この正位（ORTHOTOPIC）大動脈移植に使用するドナーは、体重約250～300 gのPVGラットです。動物を麻酔した後、腹部および胸部の被毛を剃ってください。ラットを仰向けに固定し、鼻と口にフェイスマスクを装着します。麻酔を維持しながら、腹部および胸部をProvoヨードで広範囲に消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。次に、後肢をつまんで動物の反射を確認します。十分に麻酔がかかっていることを確認します。腹部を開き、腹大動脈に穴を開けてラットを失血死させます。慎重に胸腔を開き、下行胸大動脈を探します。胸部大動脈を、脂肪、神経、食道などの周囲組織から剥離します。大動脈に組織損傷を与えないよう、acutaを用いて大動脈を1.5 centimeter切り出します。大動脈グラフトを冷生理食塩水で十分に灌流し、4 °Cで保存します。この正位大動脈移植のレシピエントには、体重約250〜300 gのA CIラットを用います。まず、麻酔をかけたラットの腹部を剃毛し、麻酔中の眼球乾燥を防ぐために眼軟膏を塗布します。ラットを仰向けに固定し、鼻と口にフェイスマスクを装着して麻酔を維持します。次に、ポビドンヨードで腹部を消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。後肢をつまんでラットが十分に麻酔されていることを確認した後、腹部正中切開を行い、皮膚と筋肉を分離して腹部を開きます。2ステップ。腹部を切開した後、腸管を生理食塩水を入れた手袋の中に移動させます。水分の喪失を防ぐため、手袋を腸管に巻き付けて覆います。腹大動脈を覆っている脂肪組織を除去します。腎下領域から分岐部まで大動脈を剥離し、血管の分枝を損傷させないよう注意してください。必要に応じて、大動脈を剥離した後に大動脈の分枝を結紮します。まず、大動脈の腎下部分にマイクロサージカルクランプを使用し、血流を遮断します。次に、大動脈の分岐点の近くに2つ目のクランプを配置します。血流を停止させた状態で、大動脈の短いセグメントを切除します。その後、氷上の0.9%生理食塩水で保存しておいたドナーの大動脈グラフトを用意します。適切な長さに切り詰め、大動脈の欠損部に配置します。まず頭側端端吻合から行い、8-0 Proleneを用いて連続縫合し、ドナー大動脈とレシピエント大動脈を接続します。遠位端端吻合が完了したら、慎重に遠位クランプを開放します。次に、頭側クランプを慎重に開放します。大動脈の遠位端に拍動が見られるはずです。続いて、腸管を腹腔内に戻し、あらかじめ温めておいた滅菌生理食塩水で腹腔内を洗浄します。6-0プロリン縫合糸を用いて、腹壁の筋肉層を連続縫合で閉鎖します。次に、ラットが麻酔下にある間に、5-0プロリン縫合糸を用いて皮膚を連続縫合で閉鎖します。カルプロフェンを4〜5 mg/kgの用量で皮下注射します。動物をケージに戻します。鎮痛剤として、3日間、飲用水にメチマゾールを添加します。移植後。120日後の組織病理学的結果を、組織顕微鏡を用いて提示します。画像では、移植血管障害の進展が明確に示されます。生じた管腔狭窄については、コンピューターアニメーションを用いて強調表示します。以上で、ラットにおけるオートトピック大動脈移植の手順を説明しました。また、組織病理学を用いて、120日後に移植血管障害が正常に誘発されることを実証しました。この手法により、慢性同種移植血管障害に対する薬剤の初期効果を検討することが可能になります。

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Medicine

医学

我々は、マウスからの腹部大動脈の部分がちょうど同種もしくは同系レシピエントにおける腎動脈下に同所移植する技術が記載されている。この手法は、均一な大きさの大きな動脈の移植が有利と認められる研究に役立つことがあります。...

血管疾患の研究のためのマウスにおける同所性大動脈移植

マウスにおける大動脈介在グラフトのプロトコルを記述します。このプロトコルの目標は、動脈の同種免疫反応とその結果として臓器移植の失敗に寄与する動脈変化に関連する病理学的プロセスと治療戦略を研究するためのモデルを提供することです。...

同種免疫により誘導される血管拒絶反応および移植動脈硬化症のマウスモデル

大動脈内腔と大動脈の縫合結紮にポリウレタン製カテーテル挿入、外栄養血管の血流の低下による慢性的な低酸素症を誘発します。この記事では、人間の AAA のものと同様の特性を持つ腹部大動脈瘤 (AAA)...

外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成

ここでは、子宮頸部マウスモデルにおける非縫合カフ技術を用いたマウスにおける異所性大動脈移植のプロトコルを提示する。このモデルは、慢性同種移植片血管症(CAV)の基礎病理を研究するために使用することができ、その形成を防ぐために新しい治療薬を評価するのに役立ちます。...

改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

我々は、ラットにおける異所性腹部心臓移植のモデルを記述し、現在の戦略の改変を暗示し、外科的アプローチを単純化する。さらに、重要な心筋細胞の耳内注射による新しい拒絶反応モデルを記述し、ラットにおける免疫学的分析をさらに可能にする。...

ラットにおける異所性心臓と心筋細胞移植のための免疫学的モデル

本論文は、ラットにおける部分的な異所性骨髄性骨切りばん移植プロトコルと、中期的なフォローアップにおけるその潜在的な結果を提示する。...

ラットにおける部分的な異所性後肢移植モデル

このプロトコルは、心臓弁のアロア活性の研究を可能にするために、腎嚢の下に大動脈弁小葉を移植するための簡単で効率的な方法を記載している。...

げっ歯類におけるヘテロトピック心臓弁移植のための簡略モデル

我々は、ロス処置をシミュレートするために、下行大動脈への肺根移植のマウスモデルを確立する方法を実証する。このモデルは、全身位置における肺自家移植片リモデリングの中長期評価を可能にし、その適応を促進するための治療戦略を開発する基礎となる。...

ロス手術のげっ歯類モデル:全身位置における同系肺動脈移植移植

ラット同所性腎移植モデルは、腎同種移植片拒絶反応のメカニズムの解明に寄与する。現在のモデルは、腎臓移植のエンドツーエンド吻合および尿管 -...

腎同種移植片拒絶反応のためのラット同所性腎移植モデル

この研究は、初心者が学び、実行できるラットでの再現可能な異所性腹部心臓移植技術を示しています。さらに、ラットの新しい大動脈弁閉鎖不全症モデルは、異所性腹部心臓移植を行い、採取後にガイドワイヤーを使用してドナーの大動脈弁を損傷することによって生成されます。...

ラットにおける修正異所性腹部心臓移植と新規大動脈閉鎖不全症モデル

この研究は、重症大動脈弁狭窄症や左心低形成症候群などの先天性心疾患に見られる内皮から間葉への移行誘発性線維症の動物モデルを提示し、詳細な組織学的組織評価、調節シグナル伝達経路の同定、および治療オプションのテストを可能にします。...

内皮から間葉への移行研究のための新生児異所性ラット心臓移植モデル

学ぶラットの同所性大動脈移植モデルによる移植血管症の発生メカニズム。PVGからCI系統への移植で新内膜形成を観察し、慢性拒絶反応の病理を解明する実験手法を詳しく解説します。

同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

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