同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

この手順の総合的な目的は、移植血管障害の発症を調査するための、正確なモデルかつ容易に実施可能な手法を確立することです。これは、PVG系統とCI系統の組み合わせを用いることで達成されます。本手順の第2段階は、ドナー大動脈の採取です。

手順の第3ステップは、レシピエントの準備です。手順の最終ステップは、ドナーの大動脈とレシピエントの大動脈を吻合することです。最終的に、病理組織学的検査を用いて内膜形成を示す結果を得ることができます。

こんにちは。私はドイツのハンブルク大学心臓センターにあるT.S. Eye Labで移植免疫学の教授を務めているSonya Schwefelです。そして私はManish Duboffです。同じくT.S. Eye Labに所属しています。

私の研究室では移植免疫に関心を持っています。このビデオでは、Wistarラットにおける移植血管症の発症を研究するための、簡便で有効なモデルである正位大動脈移植モデルをご紹介します。当研究室では、心血管移植における慢性拒絶反応を調査するためにこの手法を用いています。

正位大動脈移植モデルでは、大動脈の組織学的評価を容易に行うことができます。さらに、PVGからCIへのモデルは、移植血管症の研究に特に有用です。これは、急性血管拒絶反応が主要な混絡因子とならず、血管症の発症機序が臨床的な所見と同様であるためです。

それでは開始しましょう。この正位（ORTHOTOPIC）大動脈移植で使用するドナーは、体重約 250 to 300 g の PVG ラットです。動物を麻酔した後、腹部および胸部の被毛を剃ってください。

ラットを仰向けにし、鼻と口にフェイスマスクを装着します。麻酔を維持しながら、Provoヨードを用いて腹部と胸部を広範囲に消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。次に、後肢をつまんで動物の反射を確認します。

十分に麻酔されていることを確認します。腹部を切開し、腹大動脈に穴を開けてラットを失血させます。慎重に胸腔を開き、下行胸部大動脈を探します。

胸部大動脈を、脂肪、神経、食道などの周囲組織から剥離します。大動脈組織を損傷しないよう注意しながら、鋭利な器具を用いて大動脈を1.5 centimeter切り出します。切り出した大動脈グラフトを冷生理食塩水で十分に灌流し、4 °Cで保存します。

この同所性大動脈移植のレシピエントには、体重約 250 ～ 300 g の A CI ラットを使用します。まず、麻酔をかけたラットの腹部を剃毛し、麻酔中の眼球の乾燥を防ぐために眼軟膏を塗布します。ラットを背臥位にし、麻酔を維持するために鼻と口にフェイスマスクを装着します。

次に、ポビドンヨードで腹部を消毒し、続いて80% ethanolで消毒します。後肢をつまんでラットが十分に麻酔されていることを確認した後、腹部正中切開を行い、皮膚と筋肉を分離して腹腔を開きます。2ステップ。

腹部を開いた後、腸を生理食塩水を入れた手袋の中に置きます。腸の水分が失われないよう、手袋を腸に巻き付けて覆います。腹部大動脈を覆っている脂肪組織を除去します。

腎下領域から分岐部まで大動脈を剥離し、血管の分枝を損傷させないように注意します。必要に応じて、大動脈の剥離後、大動脈の分枝を結紮します。まず、大動脈の腎下部分にマイクロサージカルクランプを用いて血流を遮断します。

次に、大動脈の分岐点に近い位置に2つ目のクランプを装着します。血流を遮断した後、大動脈の短いセグメントを切除します。その後、氷上の0.9%生理食塩水で保存しておいたドナーの大動脈グラフトを用意します。

適切な長さに切り詰め、大動脈の欠損部に配置します。まず頭側端端吻合を行い、8-0プロレン糸を用いて連続縫合し、ドナー大動脈とレシピエント大動脈を接続します。遠位端端吻合が完了したら、慎重に遠位クランプを開きます。

次に、頭側クランプを慎重に開きます。大動脈の末端に拍動が確認できるはずです。その後、腸を腹腔内に戻し、あらかじめ温めておいた滅菌生理食塩水で腹腔内を洗浄します。

6-0プロリン糸を用いて腹壁の筋層を連続縫合で閉鎖します。次に、ラットがまだ麻酔下にある間に、5-0プロリン糸を用いて皮膚を連続縫合で閉鎖します。カルプロフェンを4～5 mg/kgの用量で皮下注射します。

動物をケージに戻します。疼痛緩和のため、3日間、飲水にメチマゾールを添加してください。移植後。

120日後の組織病理学的結果を、組織顕微鏡を用いて示します。画像により、移植血管障害の進展が明確に示されます。生じた管腔狭窄については、コンピューターアニメーションで強調して表示します。

以上で、ラットにおける同所性大動脈移植の手法を説明しました。また、組織病理学的解析を用いて、120日後に移植血管症が正常に発症したことを実証しました。この手法を用いることで、慢性同種移植血管症に対する薬剤の初期効果を検討することが可能になります。