昆虫の蛹の除去:蛹の調査方法

-発育中の蛹にアクセスするには、蛹上皮がキューティクルから分離した後、または蛹ステージP5の後に蛹を切除します。まず、無傷の蛹の腹側を手前に向けて置きます。鉗子を使用して、ケーシングの前端と蛹の頭の間の空きスペースに蛹を保持します。次に、蛹の前部をそっと壊して取り外し、頭を露出させます。

腹側の向きを保ちながら、鉗子を使用して蛹の前後軸に沿って小さな切れ目を作り、その過程で連続的なギャップが形成されるようにします。真下の蛹組織を傷つけないように注意してください。次に、蛹を隙間から外側に向かって、一度に1つずつ壊し続け、その過程で破れたケーシングを広げます。細い濡れた絵筆を使用して、露出した蛹を拾い上げてさらに調査します。プロトコルの例では、Drosophila guttiferaの蛹を取り除き、イメージングのために蛹を準備する方法を見ていきます。

●蛹の除去を開始するには、ペーパータオルに両面テープを貼り付けます。蛹を腹側を上にして両面テープの上に置きます。蛹の前面と内部の蛹の間のスペースを見つけます。鉗子を使用してこの隙間の周りの蛹をつかんで取り除き、蛹の頭の前面を露出させます。

鉗子の先端を前後軸と平行に動かして挿入します。鉗子の先端を持ち上げて、蛹を局所的に壊します。破損が蛹の後部に達するまで、このアクションを繰り返します。蛹と蛹の脚の間に隙間が形成されていることを確認し、内部の蛹への損傷を最小限に抑えながら、蛹の腹側を壊します。蛹をできるだけ壊した後、細い絵筆を使って蛹を取り出します。ddH2Oで湿らせたティッシュペーパーの上に蛹を置き、プラスチック製のペトリ皿に入れます。露出した蛹は脆弱で乾燥しやすいため、すぐに写真を撮ります。