ショウジョウバエ求愛条件付け:ハエの学習と記憶をテストする方法

-まず、単一のナイーブな、または交配されていない、Drosophila melanogatorのオスを分離します。次に、オスを条件付けるために、すでに交尾しているため求愛を受け入れないメスを追加します。オスは、彼女に向き直る、追いかける、前足で叩く、翼を伸ばして振動させて求愛の歌を出すなど、典型的な求愛行動を示します。彼はまた、舐めたり交尾したりしようとするかもしれません。どんなに努力しても、女性は受容しないままで、男性は拒絶を経験します。したがって、彼は以前に交配した女性に求愛しないことを学びます。

オスの記憶をテストするには、彼を休ませてから、彼を別の交配したメスにさらします。訓練を受けたオスは、過去の拒絶の記憶を保持しているため、このフライを口説こうとはしません。このプロトコル例では、短期および長期記憶評価のための求愛条件付けアッセイのトレーニングおよびテストフェーズでハエがどのように処理されるかを見ていきます。

- 4日齢の交配ファイルからすべての成体に麻酔をかけることから始めます。性別を分離し、単一の事前交配された女性を住宅ブロックの1列の12の井戸のそれぞれに移します。次に、麻酔なしで吸引器を使用して、ナイーブなオスを自宅の井戸から取り出し、事前に設定されたメスを含む井戸に移します。このプロセスを 2 行目で繰り返して、さらに 12 組を設定します。

学習や短期記憶をテストするには、夜明けにこの設定を行い、トレーニング期間を1時間待ちます。長期記憶をテストするには、主観的な夜明けの4時間前にペアを設定し、トレーニングを8時間続けさせます。

- 学習と記憶を確立するためには、オスが交尾に失敗することが重要であるため、トレーニング期間中は定期的にペアをチェックして、オスが拒否されていることを確認してください。

トレーニング期間が終了したら、二酸化炭素麻酔ではなく、吸引器を使用してオスをウェルからそっと取り出します。オスを新しいハウジングブロックにロードします。学習実験では、トレーニング後すぐに男性を休息時間なしでテストします。短期記憶実験では、テストステージを開始する前にオスに1時間の休息を与えます。長期記憶実験では、次の主観的な夜明けまでオスを休ませます。

実験のテスト段階に備えるために、予析した女性に麻酔をかけ、ニューノーマルの食品バイルに移します。ハエが麻酔から回復するまで少なくとも1時間待ちます。次に、テストのセットアップを準備します。求愛アリーナでの活動を記録するために、ビデオレコーダーを準備してください。

テストを開始するには、穏やかな吸引を使用して、仕切りを閉じた状態でテストオスをハウジングブロックから求愛アリーナに移します。アリーナ間のエントリーホールを移動して、18のアリーナすべてに1人の男性がロードされます。次に、同じ手法を使用して、個々の事前交配された女性を18のアリーナのそれぞれに移しますが、仕切りの反対側に移します。次に、求愛アリーナを慎重に反転させ、井戸の開口部を白いベンチの表面に向けてビデオカメラの下に置きます。次に、仕切りを取り外してビデオ録画を開始します。少なくとも 10 分間のアクティビティを記録します。実験が終了したら、バエをバキュームを使用してアリーナから取り除き、求愛室を少なくとも10分間換気してから再利用します。