フライクライミングアッセイ:Drosophila melanogasterの一般的な移動をテストする方法

●まずは成虫のショウジョウバエを一定数入手します。クライミングアッセイ用の試験チャンバーは、テープで留められた2つのバイアルで構成されています。これらのバイアルの1つには線でマークを付ける必要があります。

クライミング行動を損なう可能性のある二酸化炭素麻酔なしで、一定数のハエを試験室に移します。ハエが所定の時間回復するのを待ちます。チャンバーのマークされた面を下にして、固い表面に置かれたマウスパッドでチャンバーをしっかりとたたきます。これにより、ハエはチャンバーの底に押し込まれます。クライミングアッセイは、ショウジョウバエが重力に逆らって上向きに上昇する自然な傾向、つまりネガティブジオタクシスと呼ばれる行動を利用しています。

試験期間中、ハエは光走性の行動や光刺激に反応した動きを示す可能性があるため、ハエを直射日光にさらさないでください。ラインに到達または通過するハエの数を記録します。次に、この数値をテストされたハエの総数で割ることにより、合格率を求めます。ハエが回復するのを待ってから、試行を繰り返す。この例では、化学突然変異誘発後のショウジョウバエの運動機能を評価するために使用されているフライクライミングアッセイを観察します。

-まず、2番目の染色体にマッピングされたショウジョウバエの突然変異菌のENU変異原性コレクションに属する系統からホモ接合ハエを収集します。10〜12日齢のハエを麻酔なしで一度に1ラインずつ試験室に入れ、5分間回復させます。

5cmの線を下にして、固体表面に置いたマウスパッドでチャンバーを3回強く叩き、すべてのハエが下部からアッセイを開始するようにします。10秒間にわたって飛行運動を観察します。この時間内に5センチメートルラインに到達または通過したハエの数と、テストしたハエの総数を記録します。1 分待ってから 2 回目のトライアルを開始してください。1行あたり最低3回の試行反復を繰り返します。