ショウジョウバエ幼虫の想像上板解剖:発達中の上皮を観察する方法

- 解剖を開始するには、1対の鉗子を使用して幼虫の体を中央でつかみ、2番目のペアを使用して幼虫を半分に引き裂きます。次に、ボディを後側で保持しながら、前端でマウスフックをつまみます。次に、口を押さえている鉗子を体内に押し込みます。後部鉗子を使用して、体壁を内側に折ります。

この調製では、唾液腺と腸を簡単に識別して除去し、脳と想像椎間板を明らかにすることができます。触角、目、脚、翼、ホルターレの円盤が見えます。固定したら、幼虫の準備物を封入剤付きのスライドに移し、ディスクをさらに解剖することができます。プロトコルの例では、この幼虫の準備を使用して翼の想像上の椎間板を解剖する方法を見ていきます。

- まず、木の棒または鈍い鉗子を使用して、さまよう3番目の幼虫をPBS付きのペトリ皿に移します。次に、蛍光灯の下でそれらを遺伝子型決定し、モザイク幼虫の適切な蛍光マーカーを特定します。先に進む前に、幼虫をPBSで洗ってください。次に、解剖顕微鏡で、2対の鉗子を使用して幼虫の中心をつまみ、体を半分に引き裂きます。次に、口を体に向けて押しながらマウスフックをつまんで、体を裏返しにします。次に、唾液腺や脂肪体などの不要な物質を取り除きます。幼虫は、固定および抗体染色のために準備されました。これは、テキストプロトコールで詳しく説明されています。

染色した組織調製物を、2ミリリットルのプラスチック製転写ピペットを使用して顕微鏡スライドに移します。次に、鉗子を使用して、個々の幼虫を顕微鏡スライド上の封入剤の滴に移します。次に、鉗子を使用して、仮想ディスクを分離します。解剖した組織の端を押さえ、他の鉗子で脳と目の触角椎間板を引き離すことから始めます。脳を使えるようにしておきましょう。

次に、翼の仮想ディスクを見つけます。翼の仮想円盤は、解剖された組織の外側にくっついています。次に、1つの鉗子で組織を固定し、翼の円盤をそっと引っ掻きます。次に、脳を翼板の近くに配置して、カバーガラスに押しつぶされないように保護します。次に、構造物をカバースリップで優しく覆い、カバースリップをマニキュアで密封します。スライドは摂氏4度で保管します。