0 閲覧数 • 2:59 分 • April 30th, 2023
- 解剖顕微鏡下および血清補充培地中で、鉗子を用いて各ハエから生殖管を除去する。まず、生殖管に付随していた可能性のある消化管の一部を取り除きます。副腺と射精管を隔離するには、精巣、射精球、および終末を切除します。ティッシュをPBSで1〜2分間洗浄し、血清を除去します。その後、解離液に移します。
腺内の細胞を解離溶液にさらすには、鉗子で各腺の中心を保持し、一対の鋭い鉗子で腺をスライスします。腺の近位部分と射精管を切除して、交配に関与するタンパク質の分泌に関与するまれな二次細胞集団を含む腺の遠位端を残します。最後に、アクセサリのグランドチップをマイクロ遠心チューブに移し、消化の準備をします。次のプロトコルでは、副腺を解剖して、トランスクリプトーム分析のための二次細胞を分離します。
- 手順を開始する前に、丸く切断して炎上させ、腺を扱うための幅の広い200マイクロリットルの先端を、および複数の1000マイクロリットルの先端の開口部を炎の近くに1秒未満通過させて開口部を狭くします。次に、修正した先端を吸引速度に基づいて幅の狭いものから幅の広いものへと並べ替えます。副腺解剖では、20〜25匹のオスのショウジョウバエを氷の上のガラス皿に入れ、鉗子と解剖顕微鏡を使用して1匹のオスのハエの生殖管を切除します。
精巣や射精球を含む他のすべての組織から副腺のペアを取り除き、室温で血清を補給した培地が入ったガラスプレートに副腺を移します。副腺を20対集めたら、PBSの皿で室温で1〜2分間腺を洗います。洗浄の最後に、腺を新たに調製した解離溶液に移し、解剖顕微鏡下で鋭利な鉗子を使用して腺葉の中央をしっかりとつまみます。
2対目の鉗子を使用して、鋭い先端で組織を切断し、副腺と射精管の近位領域を二次細胞を含む腺の部分から分離します。次に、あらかじめ湿らせた炎の丸みを帯びた幅広の200マイクロリットルのピペットチップを使用して、腺を1.5ミリリットルのチューブに移します。
本記事では、トランスクリプトーム解析に向けて二次細胞を単離するため、雄のDrosophilaの副生殖腺を解剖するプロトコルについて詳述します。本手法では、さらなる研究に必要な腺を回収するために、生殖組織および消化管組織を慎重に除去します。
ショウジョウバエのオス副生殖腺二次細胞を精密に解剖・単離することで、遺伝学的操作が容易なモデルにおいて高精度なトランスクリプトームプロファイリングが可能になります。このワークフローは、生殖生物学および分泌経路研究における初期段階のターゲット検証とメカニズムのデリスキングを支援します。本手法の再現性と細胞型特異性により、下流の機能ゲノミクスやスクリーニングアプリケーションにおける予測の信頼性が向上します。
この解剖および単離プロトコルは、初期探索とリード同定のインターフェースに適合し、ターゲット選択やメカニズム研究に資する強固な細胞型特異的解析を可能にします。
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最終更新:29 8月 2026