0 閲覧数 • 4:21 分 • April 30th, 2023
- アイランドアッセイは、石鹸水のトレイに白いプラットフォームを盛り付け、片面が開いた透明なボックスで覆われています。ボックス上部のカメラは、プラットフォームの俯瞰画像を記録し、ライトが配置されてエリアが均一に照らされるようになっています。
アリーナにハエをロードするには、バイアルを平らな面に軽くたたいて、すべてのハエを底に持ってきます。すばやく続けて、バイアルプラグを取り外し、バイアルを裏返し、バイアルの開放端をプラットフォームに軽くたたいて、すべてのハエを同時にノックアウトします。プラットフォームに着陸すると、エスケープ応答がトリガーされます。典型的な可動性を持つハエは、自発運動障害のあるハエとは異なり、数秒でプラットフォームをクリアできます。
被験者は箱に閉じ込められ、石鹸が水の表面張力を低下させるため、石鹸水に着地した被験者はすぐに沈みます。さまざまな条件からの自発運動行動を評価するには、設定された時間後にプラットフォーム上の残りのハエを数えます。
このプロトコル例では、半自動画像解析と互換性のあるアイランドアッセイのセットアップを見ていきます。
- まず、生物学的複製として、実験条件ごとに最低3つのバイアルを準備します。各バイアルには、同じ性別で同様の年齢の約15匹のハエが含まれている必要があります。重要なのは、ハエは無傷の翼を持っていなければならないということです。
実験を保存するフォルダーを作成します。これらは、条件とレプリケートによって定義されたディレクトリ構造に生成します。たとえば、実験に 2 つの遺伝子型があり、それぞれに 5 回の反復がある場合は、実験の日付を含むメインフォルダーを作成し、そのフォルダー内に遺伝子型ごとに 1 つのサブフォルダーを作成します。次に、遺伝子型フォルダー内に、各レプリケートのサブフォルダーを作成します。
次に、テスト装置をセットアップします。少量の石鹸を入れた冷水をバストレイに加え、プラットフォームをバスの中央に配置します(まだバスに固定されていない場合は)。トレイとプラットフォームを透明なボックスで覆います。
プラットフォームを照らすには、通常の12ボルトLEDなどのクールランプをその上に配置します。また、コンピューターに接続されたWebカメラをプラットフォームの真上に配置します。
パソコンで、画像記録ソフトウェアを開きます。メニューから、適切なWebカメラをキャプチャデバイスとして選択します。島にデッドフライを置いて、ビデオ設定を調整します。ソフトウェアの明るさ、コントラスト、色を微調整して、死んだハエが白い背景に対して黒く見えるようにします。
次に、タイムラプスムービーの設定を調整して、ムービーをAVIファイルとして保存します。次に、データを保存するディレクトリを参照し、ムービーの名前を定義します。これらの変更を保存します。
画像データの圧縮には、Intel IYUV コードを選択します。録画速度を0.1秒ごとに1フレームに設定し、対応する再生速度を1秒あたり10枚に調整します。
最後に、[詳細設定]設定に移動し、[キャプチャしたフレームごとにBNP画像を作成する]を選択します。次に、AVIファイルのホストとして選択したのと同じディレクトリを参照し、[OK]を押します。
始める前に、島が空できれいであることを確認してください。次に、画像記録ソフトウェアのタイムラプス画像インターフェースで録画を開始します。
ハエの入ったバイアルを取り、2〜3回軽くたたいて、すべてのハエを底にノックダウンします。次に、バイアルからプラグをすばやく取り外し、フライをプラットフォームに強くたたきます。それらはすべてほぼ同時にプラットフォームにぶつかるはずです。
フライがプラットフォームを離れるまで最大30秒待ちます。次に、録音を停止します。必要に応じて、プラットフォームから残っているハエを手動で取り除きます。
次の実験に進む前に、次のデータ セットを格納するディレクトリを必ず再定義してください。