成虫ショウジョウバエの脳のマウント:共焦点イメージング用のスライドを準備する方法

- 正に帯電した顕微鏡スライドに、ショウジョウバエの脳が取り付けられるスペースを作るために、それらの間に十分な距離を置いて2つのカバースリップを接着します。実体顕微鏡下で、埋込培地の脳をそのスペースにピペットで移します。組織の負電荷は、脳がスライドの表面の正電荷に付着するのを助けます。

余分な封入剤を取り除き、触角ローブを上に向けてスライド上のブレインをグリッドパターンで正確に配置できるようにし、次に3番目のカバースリップを接着してブレインを覆うことで2つのカバースリップをブリッジします。

キャビティを埋めるには、封入剤をキャビティの端に1滴ずつ入れ、脳を乱さないように毛細管現象で広げます。

マニキュアで空洞を密封し、暗闇でマイナス20°Cで保管して、染色された組織の蛍光を維持します。

プロトコル例では、免疫染色されたニューロンの共焦点イメージングのためにショウジョウバエの脳をマウントします。

- ブレインを取り付けるには、ブリッジスライドを作成します。2つのベースカバーを、正に帯電したスライド上で約1cm離して配置します。正に帯電した面が上向きになっていることを確認します。次に、カバースリップをマニキュアでスライドに接着し、ポリッシュを完全に乾かしてから続行します。

次に、スライドを実体顕微鏡の下に置き、カバースリップの間のスペースにミディアムの脳をピペットで移します。脳の視覚化を向上させるために、照明を必ず調整してください。

次に、スライドから余分な封入剤を吸引し、脳にならないように注意します。その後、残った余分な封入剤を吸い取ります。これにより、脳をより正確に配置できるようになります。次に、鉗子を使用して、脳を触角葉が上を向くようにグリッドパターンに向けます。

次に、カバースリップを脳の上に置き、マニキュアを使用して、ベースカバースリップに取り付けられているトップカバースリップの端をシールします。

次に、センターキャビティに新しい封入剤を滴下してロードし、毛細管現象によってメディアをカバースリップの下に引き込むことができます。キャビティが満たされたら、透明なマニキュアを使用して完全に密封します。