成虫ショウジョウバエの頭部のパラフィンへの埋め込み:組織学のための組織の準備

- パラフィン埋め込みのためにハエを固定するには、麻酔をかけたショウジョウバエをハエ首輪の隙間に慎重に押し込み、頭がデバイスの上に均一に配置され、体の他の部分に付着したままになります。組織固定のために、カラーをCarnoyの溶液に入れます。Carnoy'sは、エタノール、クロロホルム、酢酸からなる変性固定剤です。

パラフィン浸潤用のサンプルを調製するには、段階的な濃度のエタノールを介してカラーを移すことにより、組織を脱水します。次に、カラーを有機溶媒である安息香酸メチルに移します。次に、ベノゾエートメチルと溶かしたパラフィン溶液に入れ、加熱してパラフィンが溶けたままになります。予熱したパラフィンのみを使用して、安息香酸メチルを除去するための精巧な一連の洗浄ステップに進みます。

次に、カラーを型にすばやく置き、溶かしたパラフィンを流し込んで完全に覆います。パラフィンが固まったら、ブロックを型から取り出し、かみそりの刃を使用して余分なパラフィンを切り取ります。カラーを折って、パラフィンブロックに埋め込まれたヘッドの列を残します。プロトコルの例では、神経変性表現型の分析のための手順が実証されています。

- まず、鉗子を使用して、被験者が首で飛ぶものを首輪に通します。すべての頭を同じ向きに合わせ、頭や目に損傷を与えないようにします。セクション内でハエの順序を簡単に識別できるように、ランダムな既知の位置にハエの無目正弦波ハエを含めます。さらに、目的のハエ株が明るいまたは白い目を持っている場合は、スライドを染色するのに十分な顔料が存在することを確認するために、ストリップに沿って間隔を置いてハエを通します。

ハエの順序と、複数のハエが使用されている場合はカラー番号を記録します。首輪が完成したら、Carnoyの溶液に3.5〜4時間入れます。一連のエタノール、安息香酸メチル、およびパラフィン洗浄を行い、ハエ組織を埋め込むための準備をします。次に、カラーをセクションごとに1つずつゴム製の角氷トレイに入れます。

気泡を避けて、溶けたパラフィンを首輪にそっと注ぎ、一晩で固めるのを待ちます。カラーを含むパラフィンブロックをトレイから取り出します。かみそりの刃を使用してパラフィンブロックを首輪から分離し、首輪をそっと折ります。体は襟に残り、頭はパラフィンブロックに残ります。