Taste Preference Assay:ショウジョウバエの摂食行動を測定する方法

- 味嗜好アッセイを実施するには、チャンバー、例えば、等しいセクションに分割されたペトリ皿を使用する。味の異なる2つの溶液からの選択を測定する場合は、無味の食品着色料を使用して、一方を赤で、もう一方を青でラベル付けします。次に、各溶液の等間隔の滴を、交互のセクションを横切って皿の端に沿って配置します。

次に、麻酔をかけられ、以前に飢えていたハエをチャンバーの中央に追加し、皿を覆います。暗い場所で実験を行い、潜在的なカラーバイアスを排除し、25°Cで設定した時間でインキュベートします。2つの解決策のどちらかを選べると、より多くの被験者は、苦い解決策などの嫌悪的な選択肢を避けながら、甘いなど、より魅力的な味の解決策を消費することを好みます。チャンバーを冷凍庫に移動して実験を停止します。

摂食行動と味の好みを測定するには、ハエの数を異なる色の腹部と比較します。プロトコル例では、さまざまなショ糖溶液の選択を測定する味嗜好アッセイのデモンストレーションを見ていきます。

- 実験を開始するには、標準的なフライバイアルの底に綿球を水で飽和させます。次に、CO2パッドに100匹の動物のセットでハエを集め、準備したバイアルにハエを追加します。コットンボールを使用して、バイアルを閉じます。次に、バイアルを横にして、環境制御されたインキュベーターに入れます。10マイクロリットルの100ミリモルスクロース溶液、13マイクロリットルの赤色食用着色料、および977マイクロリットルの水を組み合わせて、1ミリモルショ糖のコントロールタスタントを準備します。

次に、5ミリモルスクロースの実験的な味を準備します。次に、100ミリメートル×15ミリメートルのプラスチックペトリ皿を取得し、10マイクロリットルのコントロールテイスタントを3滴、プレートの端のできるだけ近く、12時の位置に配置してアッセイチャンバーを作成します。3時の位置に、10マイクロリットルの実験用テイスタントを3滴、プレートの端にできるだけ近づけて置きます。コントロールテイスタントをさらに3滴、6時の位置に置きます。次に、実験的なテイスタントをさらに3滴、9時の位置に置きます。

次に、100匹の飢えたハエのバイアルを空にして、すべての動物に麻酔をかけるのに十分な長さのCO2パッドに置きます。準備したアッセイチャンバーの中央に動物をブラッシングし、皿の蓋で覆います。アッセイチャンバーを不透明な段ボール箱に入れます。次に、ボックスの外側にテストする状態と遺伝子型をラベル付けします。セットアップ全体をインキュベーターに移動します。2時間後、段ボール箱に入ったままのアッセイチャンバーを、定量の準備ができるまでマイナス20°Cの冷凍庫に直接入れます。