0 閲覧数 • 4:18 分 • April 30th, 2023
- キャピラリーフィーダー、またはCAFEアッセイの準備をするには、色付きの液体食品で満たされたグレードまたはマークされたガラスキャピラリーを最初に、組み立て済みの実験用バイアルの上のピペットチップを通して、下端に挿入します。キャピラリーが同じ高さにしっかりと配置され、装置と接触していないことを確認してください。
各毛細血管の半月板の開始レベルをマークします。次に、実験期間中、バイアルを温度、湿度、および光が制御された環境に保管し、必要に応じてキャピラリーを交換します。CAFEアッセイ中、移動型ハエは拘束されず、マイクロピペットの底部の開放端に自由にアクセスできます。ハエは、吻を伸ばして液体を摂取し、毛細血管内の媒体を減らすときに自発的に餌をやります。
一定期間の食物消費量と好みを追跡するには、開始マークから適格な毛細血管からのその期間の終わりのレベルまでのメニスカスの下降を記録します。プロトコル例では、液体充填キャピラリーからの蒸発を減少させるためにアセンブリを改変したCAFEアッセイを見ていきます。
- 外側の開口部の1つを塞いでいるピペットチップを慎重に取り外し、最初に充填されたガラスキャピラリーの下端を挿入します。ピペットチップをキャピラリーの隣に戻して、キャピラリーを固定します。テストしたすべての食品溶液について、この手順を繰り返します。
次に、キャピラリーの端をすべてのバイアルの内側に同じレベル、蓋から3〜4センチメートルの位置に配置します。キャピラリーが漏れないように、濾紙の間にはある程度の距離を空けてください。マーカーペンを使用して、色付きの液体の上端にラベルを付けます。ストライプコードを使用して個別にラベル付けし、さまざまな毛細血管を識別できるようにします。
調製したCAFEアッセイを、格子状のインレイが付いたプラスチックの箱に入れます。スポンジブンを使用して、24時間ごとに100マイクロリットルの真水を適用し、アッセイ内の湿度を一定に保ちます。30ミリリットルの再蒸留H2Oを充填した4つの別々のバイアルを湿度デバイスとして使用し、プラスチックボックス内のCAFEアッセイの隣に置きます。
実験中は、プラスチックの箱を覆って湿度が制御された環境を作り出します。実験期間中、ボックスを温度、光、湿度が制御された気候チャンバーの安全な位置に移します。各 24 時間間隔の前に、死んだハエをメモし、生きたハエの数を使用して、次の期間のハエあたりの消費量を計算します。
アッセイの終了後、キャピラリーを交換する前に、CAFEアッセイを直立位置に保ちます。蓋を取り外したり、毛細血管の下部半月板に印をつけたりしないでください。マークの終了が最初のマークより下にない場合は、データを破棄します。使用済みのキャピラリーを、24時間ごとに長期間の実験のために新しく充填されたキャピラリーと交換します。
半月板の衰退を測定します。次に、古い毛細血管を廃棄します。次に、アッセイからキャピラリーを慎重に取り外し、データ収集のために保管します。キャピラリー内の液体が下端に達したか確認してください。キャピラリー内の液体が下端に達しなかった場合は、データを廃棄します。
実験後、セットアップを分解し、バイアル、蓋、スポンジ栓を石鹸浴で洗浄します。その後、室温で一晩乾燥させてさらに使用します。同じ遺伝子型で少なくとも3日間、実験を繰り返します。キャリパーを使用して、キャピラリーのマーク開始とマーク終了の間の距離を測定します。最後に、測定後、毛細血管を廃棄します。