幼虫リンパ腺解剖:ショウジョウバエ血球産生器官の分離

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- Drosophila melanogaster幼虫のリンパ腺は、幼虫の血リンパ液を循環する血球または血液細胞の産生に関与しています。リンパ腺を特定するには、まず、全身に血リンパを送り出す背側血管または心臓を見つけます。背側血管を頭に向かってたどり、脳を見つけます。リンパ腺は、背側血管に隣接する脳の隣にある小さな多葉構造です。

一次葉を見つけるには、腺の最大の葉を特定します。この葉には、血球の発達の異なる段階によって定義される3つのゾーンが含まれています。背側血管に最も近い髄質ゾーンには未熟な血球が含まれ、皮質ゾーンには成熟した血液細胞が含まれています。一次葉の後端には、特殊な血球で構成される後部シグナル伝達中心があります。二次ローブとターシャリ ローブは小さく、ゾーンは定義されていません。

リンパ腺を解剖するには、解剖顕微鏡、幼虫を操作するための2つの鉗子、および緩衝生理食塩水が必要になります。

この例では、免疫組織化学で使用するためにリンパ腺を解剖します。

- リンパ腺の解剖を開始するには、解剖する各実験設定について、1ミリリットルの1x PBSを24ウェルプレートの1ウェルに加えます。次に、使い捨てのトランスファーピペットを使用して、各ウェルに0.1% PBSTを1滴加えます。プレートを氷の上に平らに置きます。照明付きの実体顕微鏡ベースに清潔な解剖パッドを置きます。使い捨てのトランスファーピペットを使用して、0.01%PBSTをパッドに滴下します。

幼虫をPBSTドロップに移して解剖します。1対の鉗子で、背側を上にして、後端から約1/4の長さで溶岩を保持します。2番目の鉗子で、最初のペアのすぐ前方にあるキューティクルをつかみ、口のフックが露出するまで、幼虫のキューティクルを前方に向かってゆっくりと引っ張ります。

キューティクルを放し、両方の鉗子を使用して幼虫を二等分します。PBSTドロップから後端を取り外して廃棄します。キューティクルを固定して安定させ、次に2組目の鉗子を使用して露出したマウスフックをつかみ、そっと引き出します。これにより、キューティクルが内部構造から分離されます。

マウスフックを握ったまま、唾液腺、脂肪体、腸などの不要な構造を慎重に取り除きます。解剖された組織複合体をマウスフックでそっと持ち上げ、氷上のプレートのウェルに移します。必要な数の幼虫で解剖を繰り返しますが、固定ステップに進む前に30分の解剖時間を超えないようにしてください。.

ティッシュのマウントを開始するには、スライドガラス上にマウントバッファーを一滴垂らします。マウスフックをハンドルとして使用して、リンパ腺をバッファー液滴に移します。組織を均等に配置し、その過程で取り付けバッファーを広げます。

鉗子の1つのトングを背側血管の下に慎重にスライドさせ、取り付けバッファーの周辺に向かってゆっくりと引っ張ってリンパ腺を引き出し、平らにします。のこぎりで、リンパ腺と脳の間の背側血管を切断します。残りの組織をリンパ腺からバッファーの最も外側の端に移動します。

きれいなカバースリップを取り、取り付けバッファーに慎重に下げます。スライドはイメージングの準備ができたか、必要になるまで摂氏4度で保存することができます。

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最終更新:15 8月 2026