ショウジョウバエ成人の脳解剖:ハエの神経生物学の方法

- 解剖は、緩衝液を含む皿内で、均一な照明下で行います。腹側を上にしてハエを皿に移し、手順全体を通して準備を水中に保ちます。吻の基部を保持しながら、フライヘッドを体からそっと引き離して2つを分離します。脳はハエの頭の後ろ、つまり尾側にあります。したがって、解剖中は、臓器の損傷を避けるために、キューティクルの前面または吻側部分をつかみます。

脳を分離するには、片方の目の内側の端を保持し、吻をつかんで反対方向に引っ張って、頭嚢に開口部を作ります。その目でキューティクルを保持しながら、もう一方の目からキューティクルの内側の端をつかみ、頭嚢をゆっくりとまっすぐ引き離して脳を露出させます。必要に応じて、残留キューティクル、付着した気嚢、または気管の除去を続けます。高品質の調製物は、視神経葉、中枢脳、SOGなどの構造を保持します。プロトコルの例では、キノコの体を研究するために使用されるショウジョウバエの成虫の脳解剖の詳細なデモンストレーションを見ていきます。

- 解剖のためにセットアップするには、麻酔をかけた目的のハエを冷たい金属パッドの上に置くか、氷の上に座っているシャーレに置きます。または、二酸化炭素を排出するフライパッドを使用します。次に、解剖皿の中央にPTNを少量入れて、PTNの泡を作ります。次に、実体顕微鏡下で、均一な照明下で視野をPTNバブルで満たします。次に、ハエを腹を上にするように操作し、腹部からPTNに移します。動物をPTNに完全に浸し、PTNに沈めた全解剖を行います。2対目の鉗子で、吻をつかみ、頭を体から引き抜きます。

- 時折、吻は取り除かれますが、頭部は体に付着したままになります。これが発生した場合は、片方の網膜の内側の端をつかみ、横方向の力を加えて頭を取り除きます。

- 腹部と胸部を捨てます。このステップでは、ヘッドをPTNに保つことが重要です。中枢脳からVNCへの接続は、この方法では明らかに分析できません。次に、キューティクルの中央の穴の端で左網膜の内側の端をつかみ、鉗子を互いに直接引き離して、白い糸状の気管で覆われた不透明な構造である視葉の裂け目を防ぎます。網膜が解離すると、緊張がわずかに減少します。

- 脳が裂けるのを防ぐためには、各目の内側の端をつかみ、鉗子を非常にゆっくりと引き離すことが非常に重要です。動きが速すぎると、脳の形態が変わったり、脳組織が損傷したりする可能性があります。

- ここに示すように、鉗子の各ペアでキューティクルをつかみ、非常にゆっくりと反対方向に引っ張ります。正しく行われれば、キューティクルは脳組織から分離し、脳は無傷のままになります。このステップには、非常に鋭い鉗子が必要です。次に、周囲のキューティクルを一つずつ丁寧に取り除いていきます。頑固にくっついているキューティクルを取り除きながら、脳が潰れないように残ったVNCを掴