JoVE 実験百科事典
生物学
0 回視聴 • 3:26 分 • April 30th, 2023
- ショウジョウバエが一晩中卵を産むのを許し、寒天を添加して卵を視覚化し、酵母でコーティングしてハエが交尾して産むのを促します。卵を取り除くには、皿に蒸留水を加え、絵筆で表面をやさしく拭きます。次に、プラスチックブッシングに入れたナイロンメッシュに混合物を注ぎ、卵を集めます。卵を7%漂白剤の2ラウンドに浸して、胚から絨毛膜または保護外層を取り除きます。このプロセスはデコレーションと呼ばれます。
卵はブッシングの側面にくっついています。水で3回洗って漂白剤を取り除きます。最後に、絵筆を使用して卵をブッシングからバイアルに移し、開発を続行するか、実験ですぐに使用できるようにします。プロトコル例では、滅菌条件下でショウジョウバエの卵を収集してデコリオネートし、定義された微生物叢を持つハエを飼育します。
- ナイロンメッシュをプラスチック製のブッシングに入れて、卵収集用のふるいを準備します。翌日同じハエを使用する場合は、すぐに新鮮な酵母のブドウジュース寒天プレートが入った新しいケージに移してください。前のケージのグレープジュースプレートにはショウジョウバエの卵が入っています。死んだハエをきれいな絵筆で取り除き、寒天を壊さないように注意してください。寒天プレートを蒸留水ですすぎ、寒天の表面から卵をやさしくブラッシングしてから、メッシュにスラリーを注ぎ、卵を集めます。
バイオセーフティキャビネットを70%エタノールで滅菌し、UVライトをオンにします。すべての非生物学的供給物に70%エタノールを噴霧し、すぐにバイオセーフティキャビネットに入れてから、UVライトで滅菌します。
- バイオセーフティキャビネット内で作業したり、バイオセーフティキャビネットに新しい材料を追加したり取り外したりする際には、優れた無菌技術が実践されていることを確認することが重要です。
- 卵と一緒にブッシングを120ミリリットルの試料カップに移し、90ミリリットルの0.6%次亜塩素酸ナトリウム溶液または7%漂白剤をゆっくりとブッシングの縁のすぐ下に注ぎます。鉗子を使用して、溶液内でブッシングを定期的に上下に動かして、卵を再懸濁します。ブッシングを、90ミリリットルの漂白剤であらかじめ充填された2つ目の試料カップに直接移します。
2回目の漂白剤処理の終わりに、卵はブッシングの側面に付着し始めるはずです。漂白剤を捨て、ブッシングを滅菌水で完全にすすいでください。繰り返しになりますが、鉗子を使用して、各洗浄中に卵を数回再懸濁します。3回目の洗浄の終わりまでに、ほとんどの卵はブッシングの側面に付着しているはずです。
滅菌ペイントブラシを使用して、ブッシングの側面から卵を滅菌食に移します。酸素がチューブに入るのを防ぐために、キャップを緩めたままにしておきます。移された卵子は食事の表面に見えます。