0 閲覧数 • 2:01 分 • April 30th, 2023
- まず、バッファーを一滴、清潔な解剖パッドにピペットで入れます。次に、乾燥した生きた幼虫を液滴の上に置きます。ショウジョウバエは、他の節足動物と同様に、心臓が体の周りに血リンパを送り込み、内臓を浴びる開放循環系を持っています。節足動物の血液と間質液が結合した血リンパ液を放出するには、鉗子を使用して、幼虫の半硬質の外側の覆いであるキューティクルを開きます。
次に、死体を廃棄し、解剖プレートから血リンパ液を微量遠心チューブ内の冷却緩衝液に移します。最後に、血球計算盤を使用して、収集された血リンパ液中の細胞である血球の数をカウントします。このプロトコルでは、Drosophila melanogasterの幼虫から血リンパを採取します。
- 10マイクロリットルの1x PBSを微量遠心チューブに加え、チューブを氷の上に置くことにより、血リンパ採取を開始します。次に、10マイクロリットルの1x PBSを清潔な解剖パッドに置きます。個々の幼虫を選択し、ティッシュペーパーの上に置いて乾かします。次に、それを解剖パッドのPBS液滴に移します。
鉗子を使用して、キューティクルをそっと引き裂いて反転させ、血リンパを放出してから、死体を捨てます。ピペットで、解剖パッドから血リンパを採取します。アイスPBS微量遠心チューブに血リンパ液を加え、ピペッティングで上下に混合します。10マイクロリットルのサンプルを血球計算盤チャンバーにロードし、濃度を読み取ります。