ハエの蛹からの眼脳複合体の解剖:網膜組織を分離する方法

- まず、ショウジョウバエの蛹の背側、または背中を上にして固定します。蛹の蓋または前端を取り外して、動物の頭を露出させます。ケーシングを切り取って剥がすことで、蛹を開き続けます。解放されたら、解剖した蛹をPBSで覆い、乾燥を防ぎます。胸部をきれいに断面に切り込み、死骸の後部を取り除きます。

視葉に付着した2つの網膜を含む眼脳複合体を露出させるために、胸部の切り開いた端から上皮を引き裂き始め、頭部嚢を徐々に開き続けます。次に、目と脳の複合体をヘッドカプセルの残骸から慎重に遠ざけます。

このプロトコルの例では、さまざまなダウンストリーム分析のために組織を分離するために使用される蛹の眼脳解剖のデモンストレーションを見ていきます。

- ショウジョウバエの蛹を黒い解剖皿に置いた後、新しい両面テープを蛹から離れた解剖皿に置き、鉗子を使用して蛹の背側を上にしてテープに慎重に置きます。

皿を実体顕微鏡の下に置き、鉗子を使用して各蛹の蓋を取り除きます。マイクロダイセクションハサミを使用して各蛹ケースをスライスし、フラップして開いて頭、胸部、および前腹部を露出させ、蛹ケースの端を両面テープに固定します。

鋭い鉗子で各蛹の腹部を突き刺し、蛹を蛹ケースから取り出します。蛹をテープから離して解剖皿に置き、400マイクロリットルの氷冷PBSで蛹を覆います。鉗子を使ってお腹で一つ一つをつかみ、マイクロダイセクションハサミを使って胸部にきれいな断面切開を1回行い、蛹を半分に切ります。

2対の細い鉗子を使用して、各胸部上皮の切断端をつかみ、胸部と頭部嚢を徐々に引き裂いて開き、周囲の脂肪組織の眼脳複合体を露出させます。次に、組織をつかむことなく、鉗子を使用して、半透明のオフホワイトのダンベル型の各眼脳複合体をヘッドカプセルの残骸から遠ざけます。