0 閲覧数 • 3:56 分 • April 30th, 2023
- 成虫のハエでは、間接飛行筋(IFM)は、胸部全体にまたがるハエの最大の筋肉です。IFMは、ショウジョウバエを含む2枚の翼を持つハエの特徴的な高周波の翼の動きを調整します。2つの対立する筋線維群がIFMを構成します。
まず、背側縦筋(DLM)は、腸の上の胸部の中央面に沿って位置し、前方から後方に広がっています。次に、背側腹側筋(DVM)は胸部の上部から下部に広がり、TDT(ジャンプ筋)に隣接しています。両方の筋肉群がキューティクルに付着しています。
蛹形成(APF)後約48時間までに、成熟したIFMを簡単な解剖顕微鏡で視覚的に識別できます。このプロトコル例では、48時間APFより古い蛹からIFMを収集し、ハイスループット分析を行います。
- 48時間APF後のIFM解剖では、軽く濡らしたペイントブラシを使用して、顕微鏡スライドに取り付けられた両面粘着テープのストリップにステージングされた蛹を転写します。蛹を腹側を下にして、スライドの底に向かって前方に一直線に向けます。すべての蛹が配置されたら、鉗子を使用して前気門の上にある最初の蛹ケースをからかって開き、一対の鉗子を背側に向かってゆっくりとスライドさせ、鉗子が動くときに蛹ケースを切断します。
開いたケースから蛹を解放し、すぐに蛹を2番目の顕微鏡スライド上のPBSの滴に移します。すべての蛹が解放されたら、細いハサミを使用して蛹の腹部を胸部から切り離し、腹部を別の山に押し込みます。すべての胸部を取り除いたら、ティッシュペーパーを使用してPBSの大部分と腹部の山を取り除きます。
残りの胸部に新鮮な冷やしたPBSを一滴加えてから、ハサミを使用して頭から縦方向の体軸に沿って一気に切り取り、胸部を半分に分割します。すべての蛹を解剖したら、番号5の鉗子を使用して半切片の1つを選択し、IFMの中央の上下に1つの鉗子の先端をそっと挿入します。
最初の鉗子を静止させたまま、細いハサミを使用してIFMの一方の端をキューティクルと腱から切り離してから、蛹を180度回転させてIFMのもう一方の端をキューティクルと腱から解放します。鉗子を使用して、水の張力を使用してIFMバンドルを胸部からPBSバブルの端に移し、バンドルを所定の位置に保持します。
次に、カーカスをスライドの反対側に押し込み、残りのIFMを同じ方法で解剖します。すべてのIFMが収集されたら、5番の鉗子を使用して、サンプルに侵入した可能性のあるジャンプ筋またはキューティクルの破片を取り除きます。次に、水張力を使用して、解剖されたIFMを一対の鉗子の間に優しく捕捉し、250マイクロリットルの冷却PBSを含む1.5ミリリットルの微量遠心チューブにIFMを配置します。