JoVE 実験百科事典
生物学
0 回視聴 • 3:08 分 • April 30th, 2023
- まず、培養培地から3番目の幼虫(幼虫の形態の中で最大のもの)を選択し、水で洗って食物を取り除きます。幼虫の目、またはボルウィグ器官は幼虫の前面上部にあるため、幼虫を寒天プレートの中央に配置し、光源を動物の上に置きます。部屋の明かりを消し、幼虫が暗闇に順応するのを待ちます。
可視光線で作られた光点では幼虫はほとんど検出できないため、赤外線LEDライトをオンにしてカメラ用の動物を照らします。動物がまっすぐに這い始めるまで待って、その経路を制御します。そして、幼虫が光点に向かって直接這うようにプレートを回転させます。動物が光の中を這いずり回り、光点から離れる様子を記録します。この光回避戦術は、幼虫が餌に穴を掘ることで捕食者を避けるのに役立ちます。
次の例では、光スポットアッセイを実行して、ショウジョウバエの幼虫のさまざまな遺伝的株が光を逃れる能力をテストします。
- 幼虫をイメージングセットアップに導入する前に、ライト位置の短いビデオを取得し、フィルタリングされていないコントロール背景ビデオに「lightarea1」という名前を付けます。フィルターをカメラのレンズに戻し、実験装置から離れた場所で、幼虫をはっきりと観察しながら、できるだけ低い設定でライトを点灯させます。スプーンを使用して培養液から一部の幼虫を取り出し、3番目の幼虫をそっと選択します。
幼虫を蒸留水で洗い、幼虫を寒天プレートの中央に置きます。幼虫から余分な水分をそっと取り除き、部屋の照明を消します。幼虫が暗い環境で2分間順応するのを待ってから、赤外線LEDライトをオンにします。以下の光回避行動実験は、暗闇の中で行う必要があります。デモンストレーションの便宜上、明るい光の中で撮影しました。
幼虫をプレートの中央にそっと磨きます。幼虫がまっすぐに這い始めたら、プレートを回転させて幼虫が光点に向くようにします。「キャプチャ」、「セットアップ」、および「ビデオキャプチャ」をクリックして、保存パスを選択します。そして、「録音開始」をクリックして録音します。溶岩が光点に向かって這い、光点に入り、光点から離れるのを待ってから、[記録の停止] をクリックします。
フィルターをカメラから離し、光点の位置を短いビデオで撮影します。次に、投稿にフィルターなしのビデオ「lightarea2」という名前を付け、このビデオと「lightarea1」ビデオを比較して、ライトスポットの位置が変更されていないことを確認します。