局所熱プローブアッセイ:ショウジョウバエ幼虫の高温の侵害受容を評価する方法

- ショウジョウバエの幼虫を熱プローブアッセイ用に調製するには、所望の発育段階の動物を採取し、単一の幼虫を水の薄膜を有する試験プレートに移す。水により、幼虫はプレートの表面にくっつくことなく自由に動くことができます。

ショウジョウバエの幼虫は、侵害受容器として知られる表皮の多樹状感覚ニューロンを通じて有害な熱刺激を検出します。これらは、潜在的に有害な高温など、特定の感覚的閾値に達するまで発火しません。

熱プローブをこの感覚閾値を超える温度に設定し、侵害受容器を発火させます。プローブの先端を幼虫にそっと押し付けて熱を加えます。幼虫は有害な温度に反応し、熱侵害受容行動をとり、プローブから引き出されます。幼虫がヒートプローブから360度離れた位置で停止するか、定義された時間が経過したら停止します。応答時間を記録します。

プロトコル例では、初期の3番目のショウジョウバエの幼虫に対する局所的な熱プローブアッセイのデモンストレーションを見ていきます。

- まず、サーマルプローブの温度を目的の設定値にプリセットします。絵筆または鉗子を使用して、個々の幼虫を平らなプラットフォームにそっと移し、溶岩が薄い水の膜で覆われていることを確認します。

- 圧力の変動を最小限に抑え、熱プローブの正しい位置と角度を確保するために、練習は完璧です。

- プローブの先端をセグメントA4の幼虫にそっと押し付け、プローブと幼虫の表面との間に約45度の角度で先端に軽い圧力を加えます。圧力は幼虫の表面にわずかなくぼみを引き起こすはずであり、通常は移動を防ぐのに十分です。離脱反応が示されるまで、または20秒のカットオフに達するまで、幼虫を刺激し続けます。

応答する幼虫は、通常、最初に頭と尾を持ち上げる予備的な行動を示し、次に少なくとも360度回転する引き込み行動を示します。引き出し動作が開始されたら、プローブとの接触を解除し、遅延または引き出しにかかった時間を記録します。20秒以内に離脱行動が観察されない場合、幼虫はノンレスポンダーです。