ショウジョウバエ活動量モニター(DAM):ハエの自発運動を測定する方法

- ショウジョウバエ活動モニター(DAM)は、一方の端にフライフード、もう一方の端に通気性のあるクローザーを備えた中央の活動チューブを保持します。このセットアップは、数日または数週間続く実験中の単一のハエに対応します。

DAMは、温度、湿度、光サイクルが設定されたインキュベーターなどの制御された環境に配置します。実験は暗い部屋で行い、必要に応じて、明るい光とは異なり、ハエの概日システムに影響を与えない赤外線光源を使用してデバイスを処理します。

自発運動を記録するには、DAMの検出器からの読み取り値を保存するコンピューターシステムに装置を接続します。DAMの電子機器は、各チューブの中点から放出される赤外線ビームの完全性を継続的に検出し、定期的にデータをコンピューターシステムにアップロードします。

ハエがチューブ内を行ったり来たりしながら、赤外線ビームを横切ります。これらの中断は、各チューブのDAMによって経時的にカウントされ、フライ活動の尺度として機能します。

次のプロトコルでは、DAM システムを使用して、ショウジョウバエの成体男性の概日リズムを研究します。

- ハエをアクティビティチューブに入れる前に、アクティビティモニターを収納するために使用されるインキュベーターの電源を入れてください。インキュベーターコントロールを使用して温度を調整し、DAMシステムライトコントローラーまたはインキュベーター独自のライトコントロールシステムを使用して、目的の実験デザインに従ってライト/ダークレジームを設定します。

次に、ハエに二酸化炭素を麻酔します。次に、細い絵筆を使用して、1匹のフライをアクティビティチューブにそっと移します。細い鉗子で約半インチの1本の糸の中央をつかみ、その糸をアクティビティチューブの非食品端に挿入して開口部を塞ぎ、実験中にハエが逃げるのを防ぐと同時に、チューブへの空気の流れを可能にします。

ハエが食べ物にくっつくのを防ぐために、ハエが目覚めるまでチューブを横に置いておきます。チューブをアクティビティモニターに挿入します。TriKineticsモニターのより新しく、よりコンパクトなモデルでは、赤外線ビームが中央位置でチューブを通過するように、チューブを輪ゴムで所定の位置に保持する必要があります。

最後に、アクティビティモニターをインキュベーターに入れ、電話線を介してデータ収集システムに接続します。DAM システム収集ソフトウェアを使用して、すべてのモニターが正しく接続されていること、および各モニターからデータが収集されていることを確認します。

ハエが活動チューブにロードされ、自発運動活動モニタリングシステムの準備ができたので、データを記録できるようになりました。ハエは、目的の明暗、またはLDと温度レジームに丸2〜5日間さらすことにより、同期し、同伴されます。最も一般