成虫のハエからの中腸の解剖:消化管を分離する方法

- まず、麻酔をかけた成虫のハエから頭を取り外します。斬首されたハエを、乾燥を防ぐために、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)とウシ血清アルブミン(BSA)を含む溶液で覆います。鉗子でハエを胸部で保持し、次に2対の鉗子で腹部を引っ張って腸を露出させます。作物、または食品貯蔵袋が胸部に取り付けられるので、腸を胸部からそっと引き離します。

取り外したら、作物を腹部から引き離して腸を広げます。フライの後端を引き抜いて、腸を腹腔から解放し始めます。腸を引っ張り続けて、腹部から組織全体を引き出します。解放されたら、前腸、マルピーギ尿細管、後腸、卵巣を取り出して、ハエの主要な消化部位である解剖された中腸だけを残します。

このプロトコル例では、若年および老齢の成虫ハエから中腸を解剖し、Fluorescence-Activated Cell Sorting(FACS)によってさらに分析します。

- 解剖を開始する前に、標準的なフライベッドで40匹のハエのバイアル1本を二酸化炭素で麻酔します。次に、かみそりの刃を使用してすべてのハエの首を切り落とし、アガロースゲルでコーティングされた解剖皿に移します。アガロースを覆うのに十分な量の冷たいPBSとBSAを皿に注ぎます。ハエが浮かびます。

次に、昆虫ごとに、順番に、1対の鉗子でハエの腹部をつかみ、別の鉗子で胸部をつかみます。胸部を腹部から分離します。腸が見え、作物はまだ胸部に接続されている可能性が高いです。腸をつかんで胸部から引き抜きます。次に、作物をつかみ、腸を腹部から少し前方に引っ張って広げます。

次に、鉗子の1つを使用して腹部の後端をつかみ、もう1つを使用して前方に開いたキューティクルの縁をつかみます。後端を引っ張ってキューティクルを壊し、腸全体が腹腔から引き抜かれるまで、後端を非常に穏やかに引っ張り続けます。前腸、マルピーギ管、後腸、卵巣を切除し、むき出しの中腸を残します。

中腸が分離されたら、ガラス製のパスツールピペットを使用して、一度にいくつかの腸組織を、冷たいPBSと氷上のBSAが入った1.5ミリリットルの微量遠心チューブに定期的に移します。