ショウジョウバエ産卵選好アッセイ:ハエの意思決定をテストする方法

- メスのハエの産卵または産卵部位の好みをテストするには、個々のメスのハエに、テストチャンバー内に卵を堆積させる2つの異なる基質から選択できるようにします。ハエは利用可能なオプションを比較し、彼女が好む場所、通常は彼女の子孫に最も適した基質を選択します。

フライが多くの卵を産む準備ができていることを確認して、各試行でしっかりとした卵の数が得られるようにします。実験の最後に、ハエを取り除き、各基質上の卵を数えて、ハエの産卵嗜好を決定します。

プロトコル例では、ハイスループットアッセイを使用して、プレーンまたはスクロース含有アガロース基質の産卵選好性をテストします。

- 以前に構築されたアクリル産卵室を入手して実験を続けます。プラスチックシートを上部に挿入し、チャンバーの一部を底面として使用します。

次に、二酸化炭素パッドでメスに麻酔をかけ、各産卵アリーナに個別に負荷をかけます。ハエが二酸化炭素から回復し、新しい環境に順応するまで30分待ちます。フライが調整されている間に、チューブに10ミリリットルのマークまでアガロースを入れます。次に、750マイクロリットルの2モルスクロース溶液をチューブに入れて、150ミリモルのスクロース基質を調製します。溶かした1%アガロースのボトルを水浴に入れてください。

同じ方法でプレーン基板を準備しますが、ショ糖溶液を蒸留水と交換します。次に、チャンバーの基質片を取得し、アガロース基質の1,000マイクロリットルを各トラフにピペットで移します。アガロースを脇に置いて30分間固めます。

アガロース基質とフライの準備ができたら、産卵チャンバーの3つのピースすべてを組み立ててから、プラスチックシートを取り出します。チャンバーをフライインキュベーターに一晩置きます。

チャンバーに二酸化炭素を注入することにより、女性に麻酔をかけます。チャンバーを分解し、麻酔をかけたハエを捨てます。最後に、記録のために卵の写真を撮ります。