Electrotaxis Assay:C. elegansの移動を観察する方法
筆記録
- 感覚刺激がない場合、C.エレガンスの動きは一般的に前方にあり、逆転やターン(ランダムな方向転換操作)によって中断されます。C.エレガンスは電気受容性です。つまり、電界を感知することができます。軽度の直流またはDCにさらされると、ワームは負極または陰極の方向にまっすぐで途切れることなく経路を移動します。これはエレクトロタクシスと呼ばれる動作です。
線虫の移動をより正確に観察するには、動物をマイクロ流体デバイスに入れ、DC電界を印加します。フィールドの方向を逆にすると、ワームは反対方向、つまりカソードの方向に曲がります。交流電流を流すと、ワームが停止します。フィールドの方向の交互の変化は、ワームの神経運動システムを圧倒し、ワームの動けなくなります。DCフィールドを再度適用すると、ワームはカソードに向かって前進を再開します。
次のプロトコル例では、マイクロ流体デバイスでのエレクトロタキシアッセイを示すセットアップを示します。
- この手順を開始するには、組み立てたばかりのマイクロチャネルを、モニターに接続されたカメラが取り付けられた顕微鏡のxy-可動ステージに配置します。電源をマイクロチャネルの電極に接続します。
マイクロチャンネルの抵抗が0.6メガオーム程度であることを確認したら、マイクロチャンネルの出力管を使い捨てシリンジに取り付けます。次に、入口チューブの口をM9生理学的緩衝液に懸濁した線虫の溶液に浸します。シリンジ内に負圧を加えて、液体をチャネルに吸引します。
入口チューブと出口チューブの両方が満たされたら、シリンジを外し、チューブの相対的な高さを調整してチャネルの中央にワームを配置することにより、流体静力学的に流れを操作します。次に、両方のチューブを同じ高さで平らに置きます。エレクトロタクシス実験中にワームサンプルを切り替えるときにマイクロチャネル内の流れをゼロにするには、両方の入口チューブを同じ高さに水平にした後、まだ流れがある場合は、チューブの相対的な高さを微調整します。
- 流れが本当にゼロであるかどうかがわからない場合は、電場の極性を変更し、ワームが向きを変えるときの線速度を評価することで、ワームの動きを逆
転させることができます。- 次に、電源を適切な電圧に設定します。電気信号をアクティブにし、ワームがフィールドに順応するまで1分間の事前露光を待ちます。その間、ワームはカソードに向かって移動し始めるはずです。1分が経過したら、録音を開始します。
実験が終了したら、チャネルからすべての液体とワームを取り除きます。チャンバーを脱イオン水ですすぎ、デバイスを摂氏125度のホットプレートに置いて乾かします。
