C. elegans筋面積測定:横紋筋の形態を定量化するための標準化された方法

- C.エレガンスには2種類の筋肉があります。単一の筋節筋または非横紋筋には、咽頭と外陰部の筋が含まれます。多重筋節筋または斜め横紋筋は、ミオシン線維の規則的な横紋パターンにちなんで名付けられた菱形の体壁筋です。

それらは、断面で見た線虫体の4つの象限に縦方向に配向された4つの束として、千鳥状にペアで配置されています。各細胞には、皮下組織とキューティクルへの等間隔の付着点が多数あります。この配置は、筋肉の収縮の波をスムーズな移動に変換するのに役立ちます。

これらの筋肉を視覚化するために、蛍光共焦点顕微鏡法により、トランスジェネティックGFP標識ミオシンで固定化された線虫を画像化します。解析ソフトウェアを使用して、横紋筋細胞の面積とその細胞の繊維パターンのギャップを測定します。筋線維の組織化のギャップは、線維の劣化または細胞破片の蓄積による混乱を示している可能性があります。総面積に対するギャップ面積の比率を計算して、混乱の量を定義します。プロトコル例では、フィジーを使用して体壁の筋肉の形態を定量的に評価します。

- 筋細胞の面積を測定するには、フィジーのソフトウェアで画像を開き、ポリゴン選択を使用して、単一の斜めの筋細胞の周りを慎重にトレースします。アンカードットをドラッグして端のポリゴンの線を調整し、トレースを改善します。ソフトウェアの上部にある[分析]タブに移動し、[測定]をクリックして選択した領域を計算します。

縮退した領域または欠落した領域を持つ筋肉細胞の場合は、多角形選択ツールで欠落している領域をトレースし、再度[測定]をクリックします。複数のギャップがある場合は、それぞれを個別にトレースします。セル全体の面積に対するギャップ面積の比率を計算します。比率が高いほど、筋肉の変性が進んでいることを示し、欠損領域がない場合、比率はゼロとして計算されます。