ゼブラフィッシュレオタキシスアッセイ:異なる水流量に応答した配向挙動を測定する方法

- まず、魚を慎重に遊泳トンネルに移し、ウォーターポンプのスイッチを入れます。魚がストレスレベルを下げるために、魚を1時間順応させます。魚は、正のレオタキシスを示すか、流れる水の中で上流に向きを変える傾向があります。ビデオ解析とモデリングソフトウェアプログラムを使用して、上流から下流への各ターンで目の位置をドットでマークし、下流から上流への各ターンで異なる色のドットで魚の目の位置をマークすることにより、時間と魚の動きを追跡します。水の流量を増やして、試行を繰り返します。レオタクティクス指数は、上流を向いて過ごした時間の合計と比較することで計算でき、それによって魚の向き行動を定量化できます。このプロトコル例は、魚の方位行動に対する水流と磁場の影響を分離する実験の一部です。

- 1次元の磁場操作で磁場を設定するには、トンネルを開いたままにして、電源ユニットと磁力計のスイッチを入れます。ガステスラメーターに接続された磁気プローブをトンネル内に設置し、トンネルの主軸に沿って選択した磁場値を取得するために必要な電圧を確認します。次に、プローブを外し、フロートンネルを遊泳装置に接続します。3次元磁場操作で磁場を設定するには、コンピューター、デジタル-アナログコンバーター、およびコイルドライバーの電源を入れ、選択した磁場をxy軸とz軸に設定してから、トンネルをヘルムホルツペアセットの中央に配置します。そして、選択の磁場が設定されているので、レオタクティックテストのために1〜5匹の魚を選択します。トンネル内の魚を移し替え、トンネル内の流量を毎分4.5リットルに設定し、ポンプをONにします。

- トンネルに水を入れる前に必ず出口バルブを閉め、魚を移して開いてから流量を設定してください。

- 動物が遊泳トンネルに1時間順応した後、トンネル内の魚の行動の記録を開始し、選択した実験プロトコルに従って流量を段階的に増加させ始めます。