0 閲覧数 • 2:54 分 • April 30th, 2023
- まず、胚培地を含むシャーレにいくつかの胚を静かに移します。次に、鉗子で絨毛膜を保持し、別の鉗子で絨毛膜に裂け目を作ります。
次に、胚を涙を通してそっと押し込みます。胚から絨毛膜を取り除くと、その成長と動きが加速します。破片を取り除くには、パスツールピペットを使用して、胚を胚培地を含む別のシャーレに移します。
ペトリ皿をインキュベーターに入れ、胚を摂氏28度で成長させます。実験の前に、照明付きの水で満たされた顕微鏡ステージを摂氏28度に設定して、幼虫の行動の温度関連の偏差を回避します。
ペトリ皿をステージに置き、皿の上のカメラに取り付けます。次に、胚をカメラの視野の中央に配置します。次に、鈍い針で胚にそっと触れ、幼虫の反応をビデオカメラ録画ソフトウェアに記録します。
刺激を受けると、胚は強力な逃避反応を示します--急なターンとともに一気に泳ぎます。タッチから幼虫の脱出中のピーク加速度までの時間を測定します。
プロトコル例では、ゼブラフィッシュの幼生の外部刺激に対する応答を観察します。
- アッセイを行うには、約25ミリリットルの胚培地で満たされたシャーレを、摂氏約28度に設定された照明付き温度制御ステージに置きます。ハイスピードカメラを皿の上に置きます。ビデオ録画ソフトウェアを起動し、キャプチャ速度を毎秒1,000フレームに設定して、速い水泳速度をキャプチャできるようにします。
胚をペトリ皿の中央に配置し、視野にはっきりと見えるようにします。録音を押してから、頭のてっぺんにある鈍い針で胚に優しく触れることにより、機械感覚刺激を送達します。
胚が視野から泳いで出たり、休息に戻ったら、記録を停止します。
- 同じ幼虫の繰り返しの検査は、一部の疾患モデルで慣れを引き起こしたり、筋力低下を促進したりする可能性があります。したがって、各胚は一度だけテストする必要があります。