明暗選好テスト:ゼブラフィッシュの不安関連行動を研究する方法

- まず、魚の行動に影響を与える可能性のある外部刺激を最小限に抑えるために、テストエリアの周囲に3面の囲いを作成します。水面の反射を避けるために、拡散反射光オーバーヘッド照明を設定します。次に、ダークゾーンとライトゾーンに分かれているアリーナを、摂氏28度に保たれた生息地の水で埋めます。

アリーナを囲いの中に置きます。ハビタットタンク(テストする魚を含む)は、囲いの外に置いてください。魚がストレスを軽減するために順応させます。

次に、生息地の水槽から魚をそっと網にかけ、テスト水槽に入れます。魚をアリーナの長辺に対して垂直に配置して、どちらのゾーンにも偏らないようにします。記録ソフトウェアを使用して魚の行動を観察し、残りの魚に対してテストを繰り返します。ライトゾーンとダークゾーンで各魚が費やした平均時間を測定します。

ゼブラフィッシュは、不安なときにダークゾーンで過ごす時間が長くなる傾向があります。このプロトコル例では、エタノール曝露がゼブラフィッシュの行動に及ぼす影響を観察するために、明暗試験を行います。

- 幅9センチと1/2センチメートル、長さ55センチメートル、深さ9センチメートルと1/2センチメートルの明暗アリーナを白い防水床で取得します。アリーナの内壁に白と黒の防水反射防止紙をベルクロで貼り付け、アリーナの半分を白で、半分を黒で覆います。アリーナを5センチの深さまで、摂氏25〜28度の温度で生息地の水で満たします。テスト中は、この温度を維持してください。

アリーナを配置するための白い3面の囲いを構築することにより、外部の視覚刺激を最小限に抑えます。テストエリアには、水面での反射を引き起こさない拡散オーバーヘッド照明があり、動き追跡ソフトウェアやビデオ画像からの事後手動定量化に十分な明るさがあることを確認します。次に、行動追跡ソフトウェアの記録および動き分析パラメータを、研究課題に応じて5〜15分の試用期間で設定します。

テストする魚のグループを生息地タンク内の研究エリアに運び、アリーナの囲いの外に置きます。魚が10分間順応するのを待ちます。適切なグループから魚をそっと網にかけ、明暗アリーナの中央に置き、アリーナの長軸と平行に配置されたときに各魚を放して、魚が明るいゾーンまたは暗いゾーンに偏らないようにします。

動物が解放された直後に行動の記録を開始します。魚の追跡や魚のジャンプや凍結に関するソフトウェアの問題に注意してください。トライアルが終了したら、魚をアリーナからそっと網で囲み、保持タンクまたは生息地タンクに移します。被験者の半数がテストされた後、アリーナを180度回転させて、アリーナのどの端がエンクロージャーの開放端に向けられているかによる偏見による混乱を防ぎます。

分析を開始するには、明るいゾーンと暗いゾーンで費やした時間を調べます。各グル