新規水槽潜水アッセイ:ゼブラフィッシュの自然ストレス応答を研究する方法

- まず、新しいタンクの後ろに赤外線を置き、タンクとライトの間に白いアクリルシートを配置して、光を拡散させてまぶしさを防ぎます。次に、水道水の逆浸透によって生成された魚系の水でタンクの3/4を満たします。順応した魚1匹を保持タンクから魚系水が入ったビーカーに移し、さらに10分間休ませます。次に、水と魚を新しいタンクにそっと注ぎます。

静止画のビデオ画像を使用して、タンクの高さを計算して3で割ることにより、タンクの上部、中央、下部の領域を見つけ、追跡ソフトウェアを使用して各領域で費やした時間と総移動距離を決定します。成魚は、なじみのない水槽に入れると、通常、ストレスのために下半分を好みます。ストレスレベルが下がると、徐々に頂上まで泳ぐ頻度が増えます。実験ごとに少なくとも10匹の魚をテストします。プロトコルの例では、新しいタンクダイビングテストの実験セットアップを見ていきます。

- まず、250ミリリットルのビーカーと少なくとも2つの保持タンクに魚系の水を入れます。試験当日の朝、各実験条件で少なくとも10匹の成魚を個々の飼育水槽に移し、その後、すべての魚を少なくとも1時間、順応のために行動室に移します。動物の状態または遺伝子型が実験者にとって盲目になるようにタンクにラベルを付け、ネットを使用して、事前に充填されたビーカーに1匹の成体をそっと置きます。

成魚がビーカーに10分間順応するのを待ってから、ビーカーからの水と魚を実験的な新規タンクにそっと注ぎます。魚が水槽に入ったらすぐにカメラの録画を開始し、魚へのさらなる苦痛を防ぐためにセットアップから離れます。録音が終了したら、新しい水槽から個体を取り出し、魚を新しい飼育水槽に入れます。