インビボエレクトロポレーション:ゼブラフィッシュをトランスフェクションするための部位特異的な方法

- まず、麻酔をかけた魚を背側を上にして、あらかじめ濡らしたスポンジに入れます。エレクトロポレーションの前に、遺伝物質を標的組織、この場合は終脳と呼ばれる前脳の一部に注入します。次に、少量の超音波ジェルを頭に置きます。また、電極の先端にゲルを塗布すると、効率的な操作が容易になります。正極を頭の腹側に、負極を背側に置きます。

次に、電極をヘッドにそっと押し付け、数パルスの電流を流します。電流は、エレクトロポレーションされた細胞の原形質膜に一時的な細孔を作り、それらを透過性にします。また、この電流は、周囲に存在するDNA発現プラスミドやRNAiオリゴヌクレオチドなどの負に帯電した粒子の細胞内への移動を促進します。次の例では、エレクトロポレーションを使用して、新しいニューロンの生成に関与する幹細胞である上衣細胞に組換えプラスミドを導入します。

- 魚の終脳を少量の超音波ジェルで覆います。プラスミドを注入した動物のエレクトロポレーションのために、放出セットアップからスポンジを取り外し、電極チップの内側を超音波ゲルに浸します。魚の頭を電極の間に置き、正極を頭の腹側に、負極を背側に置きます。次に、魚の体をスポンジに保持したまま、電極を終脳に優しく正確に押し付け、フットペダルで電流を流し、5つのパルスがすべて終了するまで電極を所定の位置に保持します。