筋肉内(IM)注射:成魚の背側筋への化合物送達

- トリカイン麻酔をかけた魚を、背側を上にして濡れたスポンジに移します。魚を運んでいるスポンジを顕微鏡下に置きます。マイクロインジェクション針を体軸から45度の角度で背筋の近くに配置します。

次に、背びれの前の鱗で覆われていない場所を見つけて、大きな力を加えずに針を挿入できるようにします。次に、針をそっと挿入し、フェノールレッドなどのマーカーとともに目的の化合物を筋肉にゆっくりと注入します。

目的の化合物に遺伝物質が含まれている場合は、注入部位の両側に電極を配置し、電流を流すことにより、細胞をエレクトロポレーションします。電流により、筋肉細胞は透過性になり、遺伝物質を効率的に取り込むことができます。手順の後、すぐに魚を回収タンクに移します。次のプロトコルでは、成体のゼブラフィッシュに筋肉内注射を行い、マイコバクテリア症に対するDNAワクチンを送達します。

注入中に魚を固定位置に保つには、真ん中に溝が切られたスポンジをパッドとして使用します。スポンジをシステム水に完全に浸し、シャーレにセットします。プラスチックのスプーンを使用して、麻酔をかけたゼブラフィッシュを、魚の腹側を下にして溝に付けた湿ったスポンジに移します。顕微鏡下で、針をゼブラフィッシュの背筋の近くに45度の角度で置きます。次に、背びれの前にある鱗のない小さなスポットを見つけて、針を筋肉に押し込みます。

抵抗を感じる場合は、隣接する場所を試してください。フットスイッチを使用して、プラスミド溶液を筋肉に徐々に注入します。顕微鏡下では、フェノールレッドが筋肉組織に入ると見えるはずです。

注入直後に、注入部位の両側にピンセットタイプの電極を配置して魚をエレクトロポレーションします。エレクトロポレーターのスタートボタンを押して、40ボルト、50ミリ秒のパルスを6回与えます。次に、魚を回収タンクにそっと移します。最後に、テキストプロトコルに従って魚に麻酔をかけた後、UVライトを使用して注射部位近くのEGFP発現を確認します。