ゼブラフィッシュ患者由来異種移植片(zPDX):がんモデル

- 異種移植片とは、ある種から採取され、別の種に移植された臓器または組織です。患者由来異種移植片(PDX)は、患者の腫瘍の組織を免疫不全の動物(免疫系が完全に発達していないゼブラフィッシュの幼生など)に移植して、腫瘍の進行や薬効を研究するがんモデルです。まず、受精後48時間で幼虫をトリカイン溶液で麻酔し、E3培地で作製したアガロースを含む注射プレートに幼虫を移します。

次に、患者移植片細胞の懸濁液をロードし、マイクロキャピラリー針に移します。顕微鏡下で、マイクロキャピラリー針を使用して幼虫の卵黄嚢に細胞を注入します。次に、注入した幼虫をグルコースとLグルタミンを含むE3溶液で培養し、異種移植細胞の高いエネルギー要求をサポートします。

薬物治療では、異種移植された幼虫をウェルプレートに移し、試験が必要な化合物の数と用量に基づいてウェルをグループに分割し、化合物を追加します。コントロールグループを含めます。処理結果を観察する前に、処理した幼虫を摂氏32度でインキュベートします。

次のプロトコルでは、膵臓がんの zPDX モデルでゲムシタビンとナビトクラクスという薬を研究します。

- ゼブラフィッシュの幼生に麻酔をかけた後、修飾されたE3で満たされた注入プレートに移します。混合細胞懸濁液の25マイクロリットルをマイクロキャピラリー針に取り込み、針をマイクロインジェクションマニピュレーターに挿入します。注入圧力と時間を設定し、ゼブラフィッシュの受精後48時間の卵黄嚢に50〜80個の細胞を注入します。

異種移植後のゼブラフィッシュの幼生を摂氏32度の混合溶液40ミリリットルに移します。10匹の異種移植された幼虫を12ウェルプレートの各ウェルに入れます。次に、幼虫を4つのグループに分けます。

対照群を 0.1% DMSO を含む E3 で治療し、他の群をゲムシタビンおよび/またはナビトクラクスで治療します。すべての幼虫を摂氏32度で2日間インキュベートします。治療後に異種移植された幼虫に麻酔をかけた後、それらを3%メチルセルロースに入れます。.

蛍光顕微鏡または共焦点顕微鏡を使用して、側面図から幼虫を画像化します。次に、Image JとGraph Padソフトウェアを使用して、赤と緑の蛍光シグナルの強度を定量化します。