心臓解剖:ゼブラフィッシュの心臓発達を観察する方法

- ゼブラフィッシュの心臓は、静脈洞、心房、心室、球根性動脈症の4つの心室で構成されています。これは、蓋と胸帯の間の腹側前方に位置し、胸鰭を支える骨格系の一部です。心臓を解剖するには、安楽死させた固定魚をリン酸緩衝生理食塩水が入ったシャーレに入れて、魚組織のpHを一定に保ち、腹側を上に向けます。

目と鰓の間に鉗子で魚の頭を持ちます。マイクロハサミを使用して、えらを横切り、前腹を横切って、次に垂直に切り込み、最初の2つの切開部を接続します。鋭利なピンセットで胸鰭とその下の胸帯を取り外し、心臓を覆う膜である銀色の心膜を露出させます。鉗子で心膜を取り外して、心臓が見えるようにします。次に、球根状動脈症に接続されている動脈を切断します。

次に、鉗子を心房の下に置き、心臓を体腔からすくい取ります。鉗子で心臓を保持し、別の鉗子を使用して心臓の外側に存在する不要な組織を取り除きます。次のプロトコルでは、さまざまなサイズの魚の心臓を解剖して、魚の寿命にわたるその発達をイメージします。

- 各魚に数字と文字の組み合わせを割り当てて、個々の魚とその結果として解剖された心臓を後で分析するために追跡できるようにします。すべての測定値を含むすべてのデータをスプレッドシートに入力し、これらのラベルに基づいて整理します。解剖する前に、割り当てられた追跡番号でPCRチューブストリップを標識し、さらなる分析に適したPBTまたはその他の溶液をチューブに充填します。魚の腹側を上にしてペトリ皿に置き、鉗子で体を安定させ、頭を目と鰓の間に保持します。標準的な体長が12mm未満の魚の場合は、鋭利な鉗子またはピンホルダーのマイクロニードルを使用して、胸筋とヒレを体から取り除き、心臓を露出させます。

- 解剖中の鉗子の絶え間ない動きは、魚を動かすPBT内の電流を引き起こす可能性があります。これは、小さな魚にとって特に問題になります。これは、マイクロニードルを使用して胸筋とフィンを取り除き、体腔を開くために必要です。

- 鉗子を使用して、心房の下から空洞から心臓をそっとすくい取ります。魚に蛍光心臓マーカーが含まれている場合は、解剖に蛍光スコープを使用し、蛍光による心臓の除去を確認します。心臓が空洞から取り出されたら、鉗子を使用して心臓を保持し、マイクロニードルを使用して余分な非心臓組織と心外膜を心臓の外側から取り除きます。

標準の長さが12ミリメートルを超える魚の場合は、スプリングハンドルのマイクロハサミを使用して、3つの切開を行います。まず、えらに横方向の切り込みを入れます。次に、前腹で別の横方向の切り込みを入れます。そして第三に、両方の横方向の切り込みを接続する腹側に矢状切り込みを入れます。鋭い鉗子を使用して、胸筋とひれを体から取り除き、体腔を開き、心膜の銀色の組織を明らかにします。

この心膜組織を取り