ゼブラフィッシュの脳解剖:魚の神経生物学の技術

- 安楽死させた魚を解剖ベッドに置き、手術用ブレードを使用して鰓のレベルで魚の首を切り落とします。腹側を上にして頭を持ち、脳と目をつなぐ視神経で作られた構造である視交叉が見えるまで軟部組織を取り除きます。

視神経を切断し、目を取り除きます。次に、背側を上にして魚を向け、頭蓋骨の一部を取り除き、脳を分離します。脳を解剖培地を含むシャーレに移し、組織のpHを一定に保ちます。脳の部分を観察します。

嗅球は、匂い信号を検出する嗅覚器官に接続された前端の一対の構造です。終脳には、記憶に関連する領域が含まれています。手綱核は、終脳からの情報を脳の他の部分に中継します。

視蓋は感覚情報処理センターです。小脳は、体細胞の運動機能とバランスに役割を果たします。そして、髄質は脊髄から脳に情報を中継します。次のプロトコルでは、成体のゼブラフィッシュから脳を分離し、さまざまな領域から神経幹細胞を収集します。

まず、ペトリ皿にゲルパックを充填して解剖ベッドを準備します。次に、皿を対応する蓋で覆い、摂氏マイナス20度でインキュベートします。ゲルが凍ったら、皿を冷凍庫から取り出し、蓋の上にきれいな正方形の濾紙を置きます。紙と皿の両方をプラスチックフィルムで包みます。

次に、すべてのマイクロ解剖器具を70%エタノールで処理します。これらの滅菌したツールを解剖顕微鏡の隣に置き、完成した解剖ベッドを光ファイバー照明付きの顕微鏡の下に置きます。すぐに、事前に準備した頭部標本を解剖床の上に置き、背側が下を向くように向き

を変えます。

次に、はさみを使用して、後頭部から口にかけて軟部組織を縦方向に切り込みます。その後、鉗子で頭蓋骨の基部を露出させ、隣接する組織をすべて取り除きます。次に、頭蓋骨の側壁の1つを後頭部から始まり、脳の蓋領域に向かって移動します。反対側についてもこのプロセスを繰り返します。視神経の切断に進みます。次に、蓋骨のレベルで頭蓋骨の外側の2つの側面を取り外します

最後に、頭の腹側を上に向けます。そして鉗子を使って、頭蓋骨の最も先端部分を剥がして脳を露出させます。その後、脳と頭蓋骨の残りの部分を、ペニシリンストレプトマイシンを添加したDMM F12で構成される解剖培地を含む皿に移します。.マイクロナイフのプラスチック製のハンドルを顕微鏡下に置いて、神経構造を傷つけないように注意しながら、脳組織を清掃します。ゼブラフィッシュの脳を最大2つ使用して、全脳由来のニューロスフェアを生成します。