ゼブラフィッシュ心筋症モデル:薬物誘発性心毒性

- 心筋症は、心筋が衰え、血液を送り出す能力を失う状態です。この状態はゼブラフィッシュでも再現できます。まず、心毒性の原因となる薬剤のストック溶液をハンクス平衡塩溶液で希釈して、いくつかの作業濃度を調製します。次に、トリカイン麻酔をかけた魚を腹側を上にして、解剖顕微鏡下の保持スポンジに置きます。骨盤フィンの間に針を水平から45度の角度で配置します。

次に、針を腹腔内に1〜2ミリメートル静かに押し込み、ゆっくりと薬液を注入します。溶液が漏れるのを防ぐために、針を引き出す前に5秒待ちます。すぐに魚を新鮮なシステム水が入ったきれいなタンクに移します。重度の心毒性、心筋の損傷により毎日死亡する魚の数を記録します。本剤は、心筋細胞の細胞膜に存在する死受容体に結合し、アポトーシスを誘発し、重篤な心毒性を引き起こします。

生存曲線、つまり各薬物濃度の経時的な生存確率を示すグラフを作成します。この例では、ドキソルビシン(DOX)を注射して、成体のゼブラフィッシュに心筋症を誘発する方法を2つあります。

魚にDOXを注入する前に、魚を24時間絶食します。次に、魚をグループ化します。麻酔をかけた状態で、清潔な濾紙を使用して各魚を乾燥させ、体重を測定します。すべての魚のグループを同じ体重の10%以内に作って、各グループに同じ量のDOXを注射できるようにします。次に、各グループのDOXの使用濃度を計算して、各グループに5マイクロリットルの溶液を注入し、体重で同じ量のDOXを受け取るようにします。

次に、DOXのストックを1x HBSSで希釈します。希釈液をボルテックスと混合し、希釈液をパルススピンしてチューブ内に溜まった状態に保ちます。注入のために、注入プラットフォームを準備します。清潔な100mmのシャーレにスポンジを入れます。解剖顕微鏡の助けを借りて、スポンジに空洞を切って1匹の魚を保持します、通常は4センチメートルで機能します。

次に、34ゲージの針に10マイクロリットルのマイクロシリンジを取り付けます。次に、1x HBSSで針をすすぎ、シリンジとチューブから気泡やブロックを取り除きます。次に、成魚にトリカインで簡単に麻酔をかけます。次に、トリカインを入れた胚水にスポンジを浸し、腹部を上にして魚をスポンジに移して注射します。次に、約1〜2ミリメートルの深さの骨盤フィン間の正中線に針を45度の角度ですばやく挿入することにより、DOX溶液を腹腔内に注入します。

次に、すべてのDOX溶液をゆっくりと放出します。針を引っ込める前に、5秒待ってください。あるいは、魚を横方向に配置して、内部を右側に配置することもできます。次に、骨盤ヒレの上の側線を、ベベルアップを7時に向けて45度の角度で3〜4ミリメートルの深さで注入しました。いずれかの注射方法が成功した場合、腹に赤みがかっています。

注入後、魚を新鮮なシステム水で満たされたきれいなクロッシングタンクにすばやく移し、そこで回復できるようにします。次に、HBSSで針をすすぎ、次の魚の注入に進みます。後で、注入された魚を循環しているシステムに戻しますが、相互汚染を避けるためにメインシステムから分離しています。次の24時間は、魚を断食し続けます。最初の1週間は、注射後、毎日魚をチェックし、死んだ魚を取り除くようにしてください。