同所性注射:成体マウスへの組織特異的がん細胞の移植

まず、麻酔をかけたマウスを手術用ベッドに置き、痛みを和らげる鎮痛剤であるブプレノルフィンを肩に皮下注射します。次に、マウスの鼻を鼻マスクに挿入して、動物に酸素とイソフルランなどの麻酔薬を継続的に供給します。ラボテープを使用して、手足を固定し、クロルヘキシジンとヨウ素、2つの消毒剤、およびエタノールで胸の皮膚を滅菌します。

次に、ハサミを使用して前胸壁の中央を切開し、鉗子で皮膚を反転させて白い乳房脂肪パッドを露出させます。生物発光タンパク質を発現するがん細胞懸濁液を乳腺脂肪パッドに慎重に注入します。逆流を防ぐために、針を引き抜く前に5秒待ってください。脂肪パッドをそっと離し、滅菌縫合糸を使用して切開部を縫い合わせて閉じます。

乳腺脂肪パッド内に注入されたがん細胞は、急速に分裂して腫瘍を形成します。処置後、動物をケージに戻します。動物が麻酔から回復して自由に動き始めるまで、動物を注意深く監視します。

次のプロトコルでは、ルシフェラーゼを発現する乳腺癌細胞を成体マウスの乳腺脂肪パッドに移植します。

まず、麻酔をかけた雌マウスのつま先つま先つまみに対する反応の欠如を確認し、動物の手足を手術用ボードにテープで固定します。滅菌綿棒を使用して、手術部位をクロルヘキシジン、ヨウ素、75%エタノールで滅菌し、前胸壁の中央に5ミリメートルの皮膚切開を行います。次に、切開部に隣接する皮膚の右側を持ち上げ、滅菌マイクロダイセクションハサミを使用して胸壁から皮膚を剥がします。

皮膚を反転させて右の2番の乳房脂肪パッドを露出させ、28.5ゲージの針を備えた1ミリリットルのインスリン注射器を使用して、傷口から20マイクロリットルの癌細胞懸濁液を脂肪パッドに慎重に注入します。針を脂肪パッド内に5秒間保持して、ゼラチン状のがん細胞タンパク質混合物が固化するのを待ってから、針を取り外し、滅菌済みの5-0非吸収性縫合糸で切開部を閉じます。次に、動物を完全に横臥するまで監視しながら、動物を清潔なケージに入れます。